细胞生物学 实验四 细胞传代培养.ppt

实验四 细胞传代培养 细胞传代培养 体外培养的细胞从一个容器以1：2或1：3以上的比率转移到另一个或几个容器中进行培养的过程，称为传代培养。 一般细胞在瓶中长成单层时（约80%左右铺满瓶底时），就需作传代培养。 培养细胞的观察 游离期：细胞为圆形，折光率高。 吸附期（贴壁）：细胞悬液静置培养数小时后细胞可贴壁，呈多边形或梭形。 生长期：细胞快速生长和分裂，直至长满瓶壁，形成细胞单层。细胞透明，颗粒少，细胞界限明显，可隐约看到细胞核。 维持期：当达到一定密度时，细胞便停止分裂。此期细胞界限逐渐模糊，胞浆内颗粒增多，培养液逐渐变酸（变黄）。 培养细胞的观察 衰老期：当细胞长满瓶壁后，如不及时换液和传代培养，由于液内营养物缺乏和代谢物积累，细胞进入衰老期。此时细胞胞浆内颗粒很多，细胞透明度差。严重时细胞从瓶壁脱落。 细胞生长曲线 1951年由G．O．Gey等从人子宫颈癌组织分离出来的株细胞。HeLa是原患者假名海伦·莱恩的缩写。 实验步骤一 弃去原培养液，用D-Hanks液轻轻洗涤一遍。 加入0.25%胰蛋白酶3 ml，置室温下作用1-2分钟，同时在显微镜下观察，待细胞层出现缝隙，细胞变成圆形时即可停止消化。如未出现缝隙，继续消化，直至出现缝隙（消化时间长短与细胞种类、生长情况有关）。 倒去消化液，加入6ml培养液，即可终止剩余消化液中胰酶的消化作同，用滴管轻轻将瓶