分子生物学转录组测序yu基因敲除.ppt

置换法和插入法 置换法 G418是一种选择性培养基 正常老鼠 HSV-tk HSV-tk Target gene Exon 1 2 3 neor vector Exon 4 同源区 同源区 新霉素抗性基因 正向选择标记 负选择标记 疱疹病毒胸苷激酶基因 杀死非重组型细胞 neor HSV-tk 重组型 非重组型 基因敲除技术 完全基因敲除 条件型基因敲除 1、完全基因敲除 通过同源重组法完全消除ES细胞的靶基因活性从而导致后代动物个体中该基因完全失活。 2、条件型基因敲除 在某一特定细胞类型或细胞发育的特定阶段剔除某一特定基因的技术。具有发育的组织特异性。 1、完全基因敲除基本原理: 构建与靶基因同源 (10～15kb)的载体 外显子插有新霉素抗性基因 （neor）作为正选择的标志 疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)作为负选择 体外培养 新霉素(G418)和致死核苷类似物(GANC)作双重筛选 将重组体导入ES细胞 存活的ES细胞 了解 兄妹互交，增加隐性基因 的产生比例 了解 与完全敲除的主要区别： 1、ES受体细胞时间不同 2、发育后只在部分组织中敲除，具有组织特异性 2、条件型基因敲除 在某一特定细胞类型或细胞发育的特定阶段剔除某一特定基因的技术。具有发育的组织特异性。 常用的条件型基因敲除有： 噬菌体的Cre/Lo