高中生物选修一专题5课题2《多聚酶链式反应扩增DNA片段》.pptVIP

光吸收 波长／nm 260 240 220 280 0.1 0.2 2 、过程 ①稀释 2uLPCR反应液，加入98uL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释。 ②对照调零 以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。 取DNA稀释液100uL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。 ③计算 ④计算 DNA含量（ ug/ml）＝ 50 x（260nm的读数）x稀释倍数 公式中50的含义：50ug /ml的DNA在标准厚度为1cm比色杯中的吸光值为1。 PCR（多聚酶链式反应）技术：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，它能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 知识记忆与理解 知识体系梳理 一：生物体内DNA分子的复制 1 细胞核 拟核 线粒体 叶绿体 2 间期 3 4中脱氧核苷酸 4 DNA母链 5 DNA解旋酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 6 5端—3端 二：PCR扩增的条件及原理 DNA母链 引物 脱氧核苷酸 DNA聚合酶 缓冲液 温度 2 5端—3端 3 80度—100度 双螺旋 变性 降低 复性 三：PCR的反应过程 1 变性 复性 延伸 90度以上 50度左右 70度左右 模板 引物I 引物II 2 处于两个引物之间 指数 四：DNA含量的测定 260nm的紫外线波段 预习效果检测 1.下面关于DNA复制过程的正确顺序（ ） ①互补碱基对之间氢键断裂 ②互补碱基对之间形成氢键 ③DNA分子在解旋酶的作用下解旋 ④以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对 ⑤子链与模板链盘旋成双螺旋状的结构 A ①③④②⑤ B ①④②⑤③ C ①③⑤④② D ③①④②⑤ 2.实验室内模拟生物体内DNA的复制必需的一 组条件是（ ） ①酶 ②游离的脱氧核苷酸 ③ATP ④DNA分子 ⑤mRNA ⑥tRNA ⑦适宜的温度 ⑧适宜的酸碱度 A①②③④⑤⑥ B②③④⑤⑥⑦ C②③④⑤⑦⑧ D①②③④⑦⑧ 3.DNA的合成方向总是_____延伸（ ） A从DNA分子的左端向右端 B从DNA分子的右端向左端 C 从子链的5端向3端 D 从子链的3端向5端 4. 要使PCR反应在体外的条件下顺利的进行， 需要严格的控制（ ） A氧气的浓度 B酸碱度 C温度 D大气的湿度 体内复制 PCR反应 解旋 在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分打开 加热到90度，双链全部解开，不需要解旋酶 引物 一小段RNA 可以是RNA或单链DNA分子片段 合成子链 在引物基础上，一条链连续合成，一条链不连续合成 分别从两条链的引物端开始，都是连续合成，温度控制72度 TaqDNA酶 不需要 需要 循环次数 受生物体自身控制 30多次 1.试分析体内DNA复制与PCR反应引物的差异？ 2.PCR过程的一般步骤？ PCR反应的复性的实质？ PCR反应的实质？ ? 1 2 3 4 5 碱基 脱氧核糖 磷酸基团 碱基 脱氧核糖 碱基 脱氧核糖 5’ 3’ ① ② ③ ④ 25次 DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。 三、 PCR反应的实验操作 1、PCR仪 设备及用具 2、微量离心管 一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml 3、微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次 实质上一台能够自动调控温度的仪器 三、 PCR反应的实验操作 （1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备） （2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液） （3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合） （4）将微量离心管放在离心机上（离心） （5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应） 循环数 变性 复性 延伸 第一次 94°C,10min － － 30次 ９4℃，30s 55℃，30s 72℃，1min 最后一次 ９4℃，1min 55℃，30s 72℃，1min 1.过程中所用的仪器、缓冲液、蒸馏水、等使用高压灭菌？ ? 2.每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头？ ? 3.混合后离心处理，使反应液集中在离心管底部？ 实验中DNA含量的测定 1 、原理 可以通过计算DNA含量来评