糖的组织化学.ppt

PAS（+） PAS（-） 肝细胞癌 胆管癌 横纹肌瘤 颗粒细胞肌母细胞瘤 Ewing肉瘤 骨的网织细胞肉瘤 （四）注意事项 1.过碘酸溶液与Schiff试剂均可反复使用多次，用后密封放入冰箱4℃保存 2.新鲜配成的溶液与应用过的作用时间不同，刚配成的作用时间短，以后逐渐延长 3.过碘酸溶液在作用前应与室温接近，温度太低，造成氧化不全，影响效果 4. Schiff试剂如呈淡红色，则应弃去重配 5. Schiff试剂配法很多，区别不大，可以随意选用 6. Schiff试剂作用时，染色缸必须加盖，不然Schiff试剂将因SO2消失而失效 Schiff试剂 碱性复红 1g 1N盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠 1g 重蒸馏水 200ml 粘 液 物 质(粘 多 糖) 人体的各种腺体及其他许多组织、细胞，如结缔组织、纤维母细胞、软骨基质等都能合成和分泌粘液物质，统称为粘多糖 或粘液 分类 中性粘多糖 酸性粘多糖 1.硫酸化粘液物质 结缔组织 （强） 上皮 （弱） 2.非硫酸化粘液物质 含己糖醛酸的结缔组织粘液物质 含唾液酸的上皮粘液物质 粘液物质染色在诊断中的应用 用于一般粘液性病变的观察 肿瘤的诊断与研究：用显示粘液的染色方法进行观察和鉴别 胃粘膜上皮分泌中性粘液，而胃肠上皮化生或肠型胃癌细胞分泌酸性粘液 --AB-PAS染色区分中性与酸性粘多糖 酸性粘多糖含有硫酸基团和羧基。用阳离子染料与酸性基团结合形成盐键而显色。利用染液不同的PH值及不同的电解质浓度，可以区别酸性粘多糖的二种基团 --HID-AB法 不同PH的竞争性抑制 PH2.5时，二种酸性粘多糖均被奥蓝着色 PH1.0时，仅硫酸粘多糖着色 2.电解质浓度与粘液物质着色的关系 MgCl2浓度 显示物 0.06M 羧酸和硫酸化粘液 0.3M 弱和强硫酸化粘液 0.5M 强硫酸化粘液 0.7M 强硫酸化结缔组织粘液 0.9M 硫酸角质 显示糖分子和酸性基团的 组化方法 1.奥蓝-过碘酸Schiff氏法（AB-PAS） 【目的】鉴别胃粘液（中性粘多糖）和肠粘液（酸性粘多糖）；对鉴定肠上皮化生有一定意义 【染色原理】 奥蓝是一种水溶性氰化亚钛铜盐，带有阳电荷，与组织中的酸根结合形成盐键。 AB-PAS法：首先酸性粘多糖为奥蓝染色，不再与PAS发生反应；仅中性粘多糖为PAS阳性 【染色步骤】 1.石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗 2.1%奥蓝的醋酸（3%）液染30分钟（PH约2.5） 3.蒸馏水洗 4.1%过碘酸液氧化5-10min 5.蒸馏水洗 6.Schiff试剂作用10-30min 7.流水洗10min 8.脱水，透明，封片 Alcin blue染色液： 奥蓝1g，蒸馏水97ml，冰醋酸3ml 临用前过滤使用，调节PH2.5-3之间 【结果】 中性粘多糖（胃粘液）呈红色，酸性粘多糖（肠粘液）呈蓝色，酸性和中性混合粘液呈紫红色 AB-PAS X100 AB-PAS X200 2.高铁双胺-奥蓝法（HID-AB）法 【目的】 主要用于鉴别硫酸化粘多糖和唾液酸粘多糖，对确定肠化生类型有一定价值 正常胃粘膜上皮，十二指肠腺——中性粘液 小肠——氮乙酰化唾液酸粘液 大肠——氧乙酰化唾液酸粘液和硫酸粘液 肠型胃癌 唾液酸粘液 硫酸粘液弥漫型胃癌 中性粘液高分化腺癌 硫酸粘液中低分化腺癌 唾液酸粘液大肠型化生 硫酸粘液小肠型化生 不含硫酸粘液 高铁双胺染液 N，N-二甲基-间-苯二胺二盐酸盐 120mg