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糖类制品的分离及纯化Isolation and depuration of sugar 课题成员 顾锋 张冬 蔡立超 佘彩圆（讲解） 糖类广泛分布于生物体中，可以分为单糖、低聚糖和多糖。目前已发现不少糖类及其衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、降血脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面都具有很广泛的应用。 单糖的制备 多糖的分离纯化 粘多糖的分离纯化 常见单糖有葡萄糖、果糖、半乳糖，双糖有蔗糖、麦芽糖。 制备如下： 脱脂→去杂→浓缩→再次去杂→脱色 →浓缩 →冷却 →结晶（→进一步纯化） 多糖是由20个以上的单糖以糖苷键相连组成的聚合物，有同多糖、杂多糖之分，可以和其他物质结合成糖复合物。 多糖原料可从动植物器官、菌类及微生物发酵产物中得到。 一般多糖的分离纯化工艺： 一、分离提取方法 (extraction) （1）脱脂 由于多糖被脂质包围，通常用醇或醚回流脱脂。 （2）提取 常用的多糖提取方法： ①稀碱提取法 ②温水提取法 适合用此方法的多糖主要是不溶性胶类，用冷水浸润红0.5mol/L NaOH提取，提取液用酸中和后浓缩，再加乙醇沉淀即得到多糖。甘露聚糖、半乳糖等利用此法可得到相当纯的物质。 对于易溶于温水、难溶于冷水和乙醇的多糖采用这种方法。材料需要先用冷水浸过，再用热水提取，必要时可加热至80～90℃，搅拌提取，提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白，离心除去杂蛋白的清液，透析后用乙醇沉淀即得到多糖。 （3）除杂方法 除杂 Seveg法 三氟三氯乙烷法 三氯乙酸法 酶法 等电点沉淀法 二、纯化方法（ depuration） 由于提取液还含有多种组分的多糖混合物，因此需要进一步纯化。其方法有： （1）沉淀法（常用乙醇沉淀法） （2）盐析法 （3）季铵盐沉淀法 （4）纤维素柱层析法 （5）离子交换层析法 （6）金属配合物法 沉淀法原理： 由于不同相对分子质量的多糖在不同浓度的低级醇或低级酮中溶解性不同，可以逐步提高溶液中醇或酮的浓度以使不同组分的多糖依相对分子质量由大到小的顺序沉淀，最终达到分离的目的。 盐析法原理： 利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性沉淀作用，用硫酸铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将不同的多糖逐步析出。 季铵盐沉淀法原理： 长链季铵盐是碱性表面活性剂，酸性多糖在溶液中以聚阴离子形式存在，它就与季铵盐或其碱形成不溶性配合物沉淀，又由于多糖分子酸性越强、相对分子质量越大越易沉淀出来，这样控制 季铵盐浓度即可以分理出不同的酸性多糖。 纤维素柱沉淀法原理: 它利用的是不同多糖浓度乙醇中溶解性不同，先用4倍V的乙醇将多糖混合液沉淀在惰性的多孔纤维素柱上，再用不同浓度的乙醇洗脱，使不同多糖分离开来。 离子交换层析法原理： 多糖分子带有电荷，可以 与离子交换剂中的离子或基团结合，亲和力随多糖结构与电离性的不同而不同，一般随分子中酸性基团的增加而增强，支链多糖比支链的更易吸附，然后用不同浓度的盐溶液进行洗脱。 金属配合物法原理： 利用不同多糖能与金属离子形成配合物而沉淀下来，使用多种配位剂沉淀多糖。 黏多糖（又叫酸性黏多糖）是一类广泛存在于动物体内的含糖醛酸和氨基糖残基的复合多糖，这是一类较有发展潜力的新型生化药物或生物制品。 （1）提取： 黏多糖大多与蛋白质共价结合，首先常用酶降解部分蛋白或用碱使多糖-蛋白质间的键断裂，促进提取时的溶解。然后用普通蛋白沉淀法沉淀蛋白。 （2）分离： ①有机溶剂分离法 利用不同浓度的乙醇依次沉淀不同的黏多糖。 ②季铵化合物沉淀法 其含有酸性基团，与表面活性剂形成季铵配合物，然后用不同盐离子浓度解离。 ③离子交换层析法 用阴离子交换剂交换吸附，再用NaCl溶液进行梯度洗脱。 谢谢听讲 Thanks ！！！ 思考 1，单糖的提取分离过程？ 2，多糖的分离、除杂和纯化方法？ 3，黏多糖的分离纯化方法？