化学系-蛋白质一级结构.ppt

PFPA：pentafluoropropionic acid C2F5COOH PFPAA：Pentafluoropropionic acid anhydride C2F5-COOOC-C2F5 这两种物质在酸性条件下低温反应，可以从C端一个接一个地切除氨基酸，与质谱相结合就可以确定C端多个氨基酸的序列。 1. Eur.J.Biochem.206,691-696 (1992) 2. Chemistry Letters, 235-238 (1992) PFPA PFPAA PFPA法C端测序 二硫键定位 化 学 合 成 小 肽 PFPA法C端测序 * * * 123 * 蛋白质一级结构的测定Protein Primary Structure Hiberarchy of Protein Structure 1952年丹麦人Linderstrom-Lang最早提出蛋白质的结构可以分成四个层次: primary structure 一级结构： 氨基酸序列 secondary structure 二级结构： α螺旋，β折叠 tertiary structure 三级结构：所有原子空间位置 quanternary structure 四级结构 蛋白质多聚体 1969年正式将一级结构定义为氨基酸序列和双硫键的位置。 介于二级结构和三级结构之间还存在超二级结构（二级结构的组合）和结构域（在空间上相对独立）这两个层次。 蛋白质结构层次 肽键的特征characteristics of peptide bond Peptide is formed by connecting amino acids in a tail-to-head way 肽键与氨基酸 肽键特征 (单0.147,双0.128) 肽键特征 Two peptide planes share one point of rotation at Cα 两面角 The planar peptide group 肽链中的肽平面 氨基酸通过肽键（peptide bond) 连接起来的链状物根据其长短称为寡肽 (oligopeptide)、短肽 (short peptide)、多肽 (polypeptide) 和蛋白质，很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。(AA残基,肽链,肽单元,侧链,末端,二硫键,命名) 研究蛋白质的一级结构，就是要将氨基酸的排列顺序搞清楚。 二十世纪四十年代起，许多人不遗余力从事蛋白质的一级结构研究，Sanger第一个将一个蛋白质（胰岛素）的所有氨基酸的排列顺序通过高度的实验技巧加以确定。 肽键与氨基酸 历史上第一个被确定氨基酸序列的蛋白质胰岛素insulin John Macleod Frederick Banting 1921.5-1992.1 Collip Best History of insulin The first biochemical drug 最小的蛋白质，由A链(21 AA)和(30 AA)组成；动物胰腺?细胞分泌的一种激素,告诉细胞往里面运输糖、氨基酸、K+； 1921年Banting Best 从胰腺中抽提出了有活性的胰岛素，1923年Banting Macleod获Nobel医学奖； 1943－53年，Sanger确定了牛胰岛素的一级结构，1958年获得Nobel化学奖； 1981年，Berg（因DNA重组技术得奖）在大肠杆菌中表达了人胰岛素. Labeling of N-terminus by Sanger’s reagent FDNB Sanger试剂标记反应 历史上第一个被确定氨基酸序列的酶核酸酶ribonuclease, 124 AA Moore Stein 氨基酸自动分析仪 Edman降解法 Sanger分析法 无冕英雄Pehr Victor Edman 瑞典人, 1916.4.14-1977.3.19 1946-47年在美国留学时想到改进1930 年Abderhalden Brockmann发明的 PITC试剂的反应, 50年发明Edman degradation反应. Acta Chem Scand 4:283 (1950) 1957年移居墨尔本, 远离国际学术中心开始 过隐居生活,1967年研制的自动化仪器可以达到每小时一个氨基酸的速度; 他坚持不申请专利, 给了美国公司得以随便开发仪器的方便. 1972年