DNA提取和制备讲义.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 四、商品化的单相裂解试剂法分RNA 本法是异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法的改进方案。 以异硫氰酸胍-酚的单相裂解液裂解细胞，再加入氯仿后形成两相。 变性的DNA与蛋白质介于两相的交界面，可使用乙醇和异丙醇分级沉淀出来。 保留于上层水相的RNA，通过异丙醇沉淀与75%乙醇洗涤而制备。 四、商品化的单相裂解试剂法分RNA 目前，该法已成为实验室最常用的总RNA提取法，其产量及质量与前法相当。 Trizol 五、mRNA的分离纯化 除血红蛋白及组蛋白的mRNA外，绝大多数mRNA在其3′末端带有长短不同的poly（A）尾巴。 利用碱基配对原则，通过oligo（dT）-纤维素或poly（U）-琼脂糖凝胶的亲和层析，可以很容易地从总RNA制品中分离纯化mRNA。 1. oligo（dT）-纤维素柱层析法 2. oligo（dT）-纤维素柱离心法 3. oligo（dT）-纤维素液相结合离心法 4. 磁性球珠分离法 （1）oligo(d