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荧光定量PCR解决方案
TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD
内容概要
荧光定量PCR的原理及标记方法
荧光定量PCR数据计算方法
荧光定量PCR文献解读
MIQE标准及实验常见问题分析
定量PCR引物设计技巧
荧光定量PCR原理--定义
Real-time PCR技术:
利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循
环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起
始模板进行定量分析
与常规PCR技术的比较:
1.对PCR反应终产物进行定量和定性分析(电泳)
2.无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时监测
荧光定量PCR原理--常用名词概念
扩增曲线
荧光阈值
Ct值
荧光定量PCR原理--扩增曲线
平台期
)
荧光基团 度
强
光
荧
(
n
R
Log-liner
phase
Baselin
e
荧光检测元件 Cycle (循环数)
荧光定量PCR原理--荧光域值
前15个循环信号作为
荧光本底信号(baseline ) ) 平台期
度
真正的信号:荧光信号超 强
光
过域值,进入指数扩增期 荧
(
n
之后 R
Log-liner
荧光域值的缺省设置是 phase Threshold
3~15个循环的荧光信号的
标准偏差的10倍
手动设置:大于荧光背
景值和阴性对照的荧光最 Baselin
高值;进入指数期的最初 e Cycle (循环
阶段 数)
荧光定量PCR原理--Ct 值
)
度
强
Ct值的定义:
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