流式细胞术检测骨肉瘤中RUNX3及βcatenin表达及意义.docxVIP

流式细胞术检测骨肉瘤中RUNX3及B —catenin表达及意义 ［摘要］目的 检测骨肉瘤中RUNX3和P-catenin的表达, 探讨其关系及临床意义，以期为临床工作提供理论支持。方 法 应用流式细胞术检测86例骨肉瘤（观察组）及40例良 性骨肿瘤（对照组）中RUNX3和3 -catenin的表达，观察 其在不同临床特征中的意义，观察RUNX3和3 -catenin的 关系。结果RUNX3和3 -catenin在骨肉瘤中的表达量明显 低于对照组，骨肉瘤中RUNX3和B-catenin的表达量在不 同软组织浸润及不同Ennecking分期的比较中，有明显差别。 线性相关分析显示骨肉瘤中RUNX3和3 -catenin具有正相 关。结论RUNX3和-catenin在骨肉瘤中表达异常，两者 可能存在协同作用，检测两种术后的表达对判断预后有一定 价值。 ［关键词］骨肉瘤；RUNX3； 0-catenin；流式细胞术 ［中图分类号］R738. 1 ［文献标识码］A ［文章编号］ 1673-9701 （2012） 32-0004-02 骨肉瘤临床多见，其在发展过程中可见机体多种蛋白质 异常表达：lloRUNX3是一种抑癌基因，定位于染色体lp36. 1, 基因序列高度保守，对细胞的生长发育过程发挥重要作用 ［2］ o P -catenin是黏附家族的一个经典成员，是上皮细胞 表面的重要黏附分子［3］。本实验应用流式细胞术检测骨肉 瘤中RUNX3和0 -catenin的表达，关注其临床价值，旨在 为临床工作提供理论支持。 1材料和方法 1. 1临床资料 收集我院、山东大学齐鲁医院、山东大学第二医院经病 理证实的骨肉瘤86例新鲜标本作为观察组。纳入均经病理 学确诊，并符合WHO关于软组织与骨肿瘤病理学和遗传学的 诊断标准。年龄为18?59岁，平均39. 08岁，其中男50例, 女36例。患者手术前均未进行任何放化疗。对照组为同期 在我院治疗的良性骨肿瘤术后脱钙的标本40例，骨样骨瘤 20例，骨母细胞瘤20例，年龄18?56岁，平均38.9岁。 两组在一般临床特征的比较中，无明显差别，具有可比性。 1.2流式细胞术检测方法 RUNX3和B-catenin试剂均购自武汉博士德生物技术有 限公司。RUNX3和3 -catenin的检测应用流式细胞术。具体 步骤：将脱钙后的标本置于不锈钢网上，将组织剪成碎屑， 然后用镶子轻搓，生理盐水同时冲洗，直到组织搓完。收集 混悬液，过滤，离心,制成1 X 106/mL单细胞悬液，加入抗 体后孵育30 min,然后洗涤，撇弃上清液，加入二抗工作液 FITC-IgG 100 uL,孵育 30 min,加入 PBS 10 mL,离心， 撇弃上清。加入PBS,过滤后上机进行检测［4］。流式细胞仪 （美国BC公司生产），免疫荧光数据分析应用系统自带软件 进行。 1.3结果判定标准 1.4统计学处理 采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，计数资料用均数 土标准差表示，采用t检验，P 0. 05为差异有统计学意义。 2结果 2. 1 RUNX3和0 -catenin在观察组与对照组中的表达 RUNX3和B -catenin在观察组与对照组中的表达量均存 在明显差异，P 0. 05o见表lo 2.2观察组中不同临床特征患者RUNX3和3 -catenin 的表达差异 观察组中RUNX3和3-catenin的表达与骨肉瘤的软组 织浸润及Ennecking分期相关。见表2。 2. 3观察组中RUNX3和3 -catenin表达的关系 经线性相关分析，骨肉瘤中RUNX3和B-catenin的表 达呈正相关（r 二 0. 45, P 二 0.034 2〈 0.05）。 2.4观察组中RUNX3和0-catenin的表达与预后的关 系 观察组患者随访时间为8-48个月，平均28.2个月， 观察组中RUNX3和-catenin的表达与预后相关（P 0.05）,即RUNX3和3 -catenin低表达的患者预后差。 3讨论 骨肉瘤是临床常见，细胞连接和细胞外基质多存在异 常。控制RUNX3基因转录的是P1和P2启动子，这两个启动 子结构不同。P2在外显子2之前，周围有一个CpG岛，富含 GC启动子的特征，是一个高度保守区。RUNX3与肿瘤的发展 有密切关系，是一个抑癌基因，抑癌的机制尚不十分清楚 ［5］。RUNX3对消化道上皮细胞的生长具有重要的调控作用， 能抵抗TGF-B诱导的细胞生长抑制和细胞凋亡，从而调控 上皮细胞的分化过程［6］。而当RUNX3失活时，影响TGF-B 凋亡信号的传导，阻滞正常的凋亡过程，正常细胞的增殖不 受限制，出现细胞恶变。3 -catenin是黏附家族的成员，与 其他黏附家族成员一起与E-cadh