信号通路研究的技术方法.pptVIP

MAPK MKK Substrates Loop-12 is a key structure to determine the selection of substrate ? ? (...TXY...) 四、病毒技术对于揭示细胞信号通路的作用 腺病毒 逆转录病毒 几种MAPK通路抑制剂的化学结构示意图: O NH2 OCH3 O PD98059 HN N S O F CH3 N OH N F N H N SB202190 SB203580 CH=CH? CH=CH? OH OCH3 OH OCH3 O O Curcumin 五、细胞信号分子特异性抑制剂的应用 Effects of SB203580 and PD98059 on endogenous PRAK activity HSP27 TNF? + + + - - - - - - - - - Arsenite + + + - - - - - - - - - PMA + + + - - - - - - - - - SB203580 _ - - - + - - + - - - + PD98059 - - - - + - - + - - + - LPS EGF Control 六、细胞信号分子的荧光标记 p38 p38? p38? p38? THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 p38 p38? p38? p38? LPS、UV刺激心肌细胞共聚焦显微镜大体扫描 LPS Control UV 蛋白质三维结构分析对于揭示信号分子的功能的作用 七、细胞信号分子的三维结构分析 PH TH SH3 SH2 Kinase Btk SH3 SH2 Kinase Src 蛋白激酶结构域 八、蛋白质与蛋白质相互作用的研究 1.蛋白质结合实验 2.免疫共沉淀实验 3.FRET 和 BRET 荧光能量共振转移(Fluorescence resonance energy transfer) 生物发光共振能量转移(bioluminescence resonance energy transfer) 4.酵母双杂合系统 Identification of MEF2C as a substrate for p38 第一步 附着 第二步激活 第三步 紧密粘附 第四步渗出 EC EC ：趋化因子受体 ：PECAM ：白细胞整合素 ：选择素 ：选择素配体 ：白细胞激活物 ：Ig家族成员 白细胞的渗出过程 5.噬菌体展示技术 九、报告基因技术 研究细胞信号转导通路通过转录因子对基因启动子转录活性的影响。 0 5 1 0 1 5 Relative luciferase activity Control LPS EGF LPS+FHPI p38 is involved in the enhancement of TNF-? promoter transactivity Induction of c-Jun through MEF2C phosphorylation by p38 EMSA 十、蛋白质与核酸相互作用技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录因子与特定核酸序列的相互作用。 反义核酸技术的应用 十一、对细胞内信号分子的干预技术 研究细胞内蛋白质尤其是转录因子与特定核酸序列的相互作用。 RNAi RNAi Figure 1. Effects of mex-3 RNA interference on levels of the endogenous mRNA. Nomarski DIC micrographs show in situ hybridization of 4-cell stage embryos. (A) Negative control showing lack of staining in the absence of the hybridization probe. (B) Embryo from uninjected parent showing normal pattern of endogenous mex-3 RNA (purple staining). (C) Embryo from parent injected with purified mex-3 antisense RNA. These embryos (and the parent animals) retain mex-3 mRNA, although levels may be somewhat less than wild type. (D) Late 4-cell stage embryo from a parent injected with dsRNA corresponding