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色谱分析法总结 基本原理 概述：混合物的快速分析分离。 色谱分析的目的是将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远，两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的热力学性质有关。但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的动力学性质有关。 一、分配系数K 分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次的分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次的吸附-脱附过程。 分配系数是每一个溶质的特征值，它仅与固定相和温度有关。 二、分配比k 又称容量因子，指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。即 k值越大，组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。决定于组分及固定相热力学性质。 VM为流动相体积，VS为固定相体积，对不同类型色谱柱，VS的含义不同。 分配比k值科直接从色谱图测得。 三、滞留因子R us：组分在分离柱内的线速度；u：流动相在分离柱内的线速度； 若用质量分数表示 若组分和流动相通过长度为L的分离柱，需要的时间分别为tR和tM，则： 由以上各式，可得： tR = tM(1+k)。 分配系数K与分配比k的关系 β称为相比率，是反映各种色谱柱柱形特点的又一个参数。 塔板理论 假设： (1) 在每一个平衡过程间隔内，平衡可以迅速达到； (2) 将载气看作成脉动（间歇）过程； (3) 试样沿色谱柱方向的扩散可忽略； (4) 每次分配的分配系数相同。 按照这种假设，对于一根长为L的色谱柱，溶质平衡的次数应为 n = L / H n 又称为理论塔板数。 按照塔板理论，理论塔板数与色谱参数之间的关系为 保留时间包含死时间，在死时间内不参与分配。 用 tR 代替 t 讨论： 当色谱柱长度一定时，塔板数n 越大（塔板高度H越小），组分在柱内被分配的次数越多，柱效能则越高，所得色谱峰越窄。 不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，用有效塔板数和有效塔板高度作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质。 柱效不能表示被分离组分的实际分离效果，当两组份的分配系数K相同时，无论该色谱柱的塔板数多大，都无法分离。 塔板理论用热力学观点形象的描述了溶质在色谱中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，并成功的解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，还提出了计算和评价柱效的参数。但由于它的某些基本假设并不完全符合柱内实际发生的分离过程，例如，纵向扩散是不能忽略的。它也没有考虑各种动力学因素对色谱柱内传质过程的影响，因此它不能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种因素，也不能说明为什么在不同流速下可以测得不同的理论塔板数，这就限制了它的应用。 速率理论 速率方程H = A + B/u + C·u 涡流扩散项A A = 2λdp 固定相颗粒愈小，dP↓，填充得愈均匀，A↓,H↓,柱效n↑ 分子扩散项B/u B = 2 νDg 存在着浓度差，产生纵向扩散，扩散导致色谱峰变宽，H↑(n↓),分离变差。 分子扩散项与流速有关，流速↓，滞留时间↑，扩散↑。 扩散系数：Dg ∝(M载气)-1/2 ； M载气↑，B值↓。 传质阻力项C·u 传质阻力包括气相传质阻力Cg和液相传质阻力CL即：C =（Cg + CL） ; 降低固定相颗粒直径dp，选择摩尔质量小的载气，C↓，H↓. 降低液膜厚度df可以减小传质阻力，C↓，H↓ 提高温度，减小传质阻力，C↓,H↓。 载气流速与柱效——最佳流速 载气流速高时： 传质阻力项是影响柱效的主要因素，流速Y，柱效?。 载气流速低时： 分子扩散项成为影响柱效的主要因素，流速Y,柱效Y 。 H-u曲线上有一最低点——最佳流速与最小塔板高度。 讨论： ① 被分离组分分子在柱内运行的多路径与涡流扩散、浓度梯度所造成的分子扩散及传质阻力使气液两相间的分配平衡不能瞬间达到等因素是造成色谱峰扩展柱效下降的主要原因。 ② 通过选择适当的固定相粒度、载气种类、液膜厚度及载气流速可提高柱效。 ③ 速率理论为色谱分离和操作条件选择提供了理论指导。阐明了流速和柱温对柱效及分离的影响。 各种因素相互制约，如载气流速增大，分子扩散项的影响减小，使柱效提高，但 同 时传质阻力项的影响增大，又使柱效下降；柱温升高，有利于传质，但又加剧了分子扩散 的影响，选择最佳条件，才能使柱效达到最高。 四、分离度R 图中说明了柱效和选择性对分离度的影响。④中两色谱峰距离近并且峰形宽