浅析高效液相色谱法对乳制品中三聚氰胺的应用.docVIP

浅析高效液相色谱法对乳制品中三聚氰胺的应用 食品安全 浅析高效液相色谱法对乳制品中三聚氰胺的应用 展惠敏 新疆昭苏县质量与计量检测所835600 摘要:本文详细阐述了高效色谱法在乳制品检验三聚氯胺的应用. 前言 1试验材料与方法 1.1仪器与试剂 1.1.1Agilentl200高效液相色谱仪(美 国Agilent公司),超声波清洗仪,离心机, 真空抽滤器,漩涡混合器. 1.1.2甲醇:色谱纯; 1.1.30.024mol/L磷酸二氢钾:准确称取 3.2g磷酸二氢钾(分析纯),用高纯水溶解, 定容至lO00mL,过0.45lam滤膜; 1.1.422g/L乙酸铅:准确称取22g乙酸 铅(分析纯),用高纯水溶解,定容至lO00mL: 1.1.5lOg/L三氯乙酸:准确称取10g三 氯乙酸(分析纯),用高纯水溶解,定容至 1000mL: 1.1.6三聚氰胺标准储备液:准确称取 0.1ooOg三聚氰胺(gt;99.9%),用50%(Ⅵ,v) 甲醇水溶解并定容至t00mL’三聚氰胺含量 为lmg/mL;再用甲醇水梯度稀释成1.O,5.O, 10.0,20.0,50.0,100.0ueCmL的标准溶液. 1.2色谱条件 色谱柱:强阳离子交换色谱柱ZORBAX 300一SCX(4.6ramx150mm,5um,Agilent); 流动相:0.024mol/L磷酸二氢钾:甲醇:9O::10 (v_V);流速:lmL/min;柱温:35℃;进样 量:20L;检测器:二极管阵列检测器 (DAD),检测波长235nlTl. 2样品处理 2.1奶粉. 称取5g(精确至O.Olg)于50mL比色管 中,加入10mL乙酸铅溶液(1.1.4),漩涡混 合lmin,用三氯乙酸溶液(1.1.5)定容至50mL, 混匀后,放入超声波清洗仪超声加热提取 15min后(温度为45*C),以不低于10000r/min 离心10min,取上清液过微孔滤膜(0.45m) 后,供HPLC测定. 2.2液态奶(原料乳,纯牛奶,酸奶, 含乳饮料,植物蛋白饮料) 称取10g(精确至O.01g)于50mL比色 管中,加入10mL乙酸铅溶液(1.1.4),10mL 三氯乙酸(1.1.5),用高纯水定容至50mL, 余下同13.1中”……,供HPLC测定. 3结果与分析 3.1色谱图 在1.2色谱条件下,得到三聚氰胺标准色 谱图,走样时间15min,标准品保留时间10min standardbyHPLC 3.2光谱图 如图所示,三聚氰胺在波长为235nm处 具有较大吸收,因此选择在波长为235nm下 进行检测:根据三聚氰胺光图谱可以对样品 图2三聚氰胺光谱图 表二改进方法回收率与精密度(n=6) Figure2.Spectrogramofmelamine 3.3线性范围和检出限 在选定的色谱条件下,进样2OuL,以三 聚氰胺质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线,结果见表一与图三所示;回 归方程为y--65.527x.37.619,相关系数 R=0.9999,说明在1.0~100.O~e#oL范围内存 在良好线性关系.根据信号与噪声比值大于3 时作为检出限,得出本方法检出限为 O.3~g/mL. 表一浓度与峰面积线性 Table1C0ncentrationandpeakarea 1inear O2OB080IO0l20 厦量诳虚(v-~/_口L) 图3三聚氰胺标准曲线 Figure3.Calibrationcurveofmelamine 3.4回收率与精密度 选择三种不同的样品(奶粉,纯牛奶) 添加三种浓度的标准品,分别按照以上样品 处理方法与GB/T22388-2008提取,测定三聚 氰胺的质量浓度,加标回收,相对标准偏差 见表二与表三 Table2Spikedrecoveriesandprecisionofimprovedmethod 奶粉 O 纯牛奶 O 通过表二与表三比较,改进后的检测方 法与国标GB/T22388.2008方法比较,该方法 不仅快速,简单,而且回收率,精密度,准 确性较高. 4结论 通过研究,我们可以得出改进的方法操 5.O lO.0 2O.O 5.0 10.O 20.0 4.72 9.39 19.1 4.92 9.66 18.7 作快速,简单,具有检测成本低廉,减少有 机溶剂消耗,免去固相萃取步骤等优点,可 为乳制品中三聚氰胺的检测提供参考. 参考文献 [1]倪沁颜.福建分析测试报[J]. 2008.l7(6):57 94.4 93.9 95.5 94.4 96.6 4.25 3.92 3.86 3.95 2.86 93.5—3.Ol [2]国家质量监督检验检疫总局.GB丌 22400-2008原料乳中三聚氰胺快速检测液相 色谱法ES].北京: