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提醒 ⑴第一步和第二步需要限制酶,且要求用同一种,目的是产生相同的黏性末端。 ⑵第二步中有二种工具酶并用到了运载体,故是基因工程中最核心的一步。 ⑶对基因操作是否成功不但要在分子水平上鉴定还要在个体水平上鉴定。 ⑷目的基因指要表达的基因,标记基因指运载体上且用于鉴定筛选的基因。 ⑸目的基因表达的标志:通过转录、翻译产生相应的蛋白质。 2.(2010·浙江卷,2)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中,下列操作错误的是 ( ) A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和运载体 C.将重组DNA分子导入烟草原生质体 D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 对位训练 答案 A 解析 构建重组DNA分子时,需用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和运载体,再用DNA连接酶连接形成重组DNA分子,而烟草花叶病毒的遗传物质是RNA,所以A项错误。重组DNA分子形成后要导入受体细胞(若是植物细胞,则可导入其原生质体),若导入的受体细胞是体细胞,经组织培养可获得转基因植物。目的基因为抗除草剂基因,所以未成功导入目的基因的细胞不具有抗除草剂的能力,可用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞。 作物育种方式包括杂交、诱变、单倍体育种、多倍体育种以及基因工程育种,育种的最终目的就是改变原有品种的遗传物质,培育出符合人类需求的新品种。在具体解题中,要正确区分不同育种的特点,恰当使用育种程序步骤综合分析,寻找出解题突破口。例如:绝大多数生物为二倍体,所以,其单倍体应高度不育,但对于部分属于多倍体的配子发育成的个体则有可能可育。同时,注意几种育种方法的处理时间,如利用基因突变育种时,处理时间是细胞分裂的间期,利用染色体变异育种时,处理时间是萌发的种子或幼苗。 方法体验 育种方式的综合应用 典例 (2010·安徽理综,31Ⅰ)如图所示,科研小组用60Co照射棉花种子,诱变当代获得棕色(纤维颜色)新性状,诱变Ⅰ代获得低酚(棉酚含量)新性状。已知棉花的纤维颜色由一对基因(A、a)控制,棉酚含量由另一对基因(B、b)控制,两对基因独立遗传。 ⑴两个新性状中,棕色是__性状,低酚是__性状。 ⑵诱变当代中,棕色、高酚的棉花植株基因型是__,白色、高酚的棉花植株基因型是__。 ⑶棕色棉抗虫能力强,低酚棉产量高。为获得抗虫高产棉花新品种,研究人员将诱变Ⅰ代中棕色、高酚植株自交,每株自交后代种植在一个单独的区域,从________________________的区域中得到纯合棕色、高酚植株。请你利用该纯合子作为一个亲本,再从诱变Ⅰ代中选择另一个亲本,设计一方案,尽快选育出抗虫高产(棕色、低酚)的纯合棉花新品种(用遗传图解和必要的文字表示)。 显性 隐性 AaBB aaBb 不发生性状分离(或全为 棕色棉,或没有出现白色棉) 典例 下列关于限制酶和DNA连接酶的理解,正确的是( ) A.其化学本质都是蛋白质 B.DNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键 C.它们不能被反复使用 D.在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶 易错警示 对基因工程中一些观点辨析不清 错因分析 对DNA连接酶和DNA聚合酶的化学本质、作用化学键和作用对象模糊不清。 解析 限制酶与DNA连接酶的化学本质都是蛋白质;DNA连接酶连接的是两个DNA片段间相邻两个脱氧核苷酸间的磷酸二酯键;酶在化学反应前后其数量、性质、功能均不发生改变,因此可以反复利用;DNA聚合酶是在细胞内DNA分子复制时发挥作用的,不能替代DNA连接酶。 答案 A 纠错笔记 ⑴限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用部位都是脱氧核苷酸之间形成的磷酸二酯键(不是氢键),只是一个切开,一个连接。 ⑵质粒是最常用的运载体,不要把质粒同运载体等同,除此之外,噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。运载体的化学本质为DNA,其基本单位为脱氧核苷酸。 ⑶要想从DNA上切下某个基因,应切2个切口,产生4个黏性末端。 ⑷DNA酶即DNA水解酶,是将DNA水解的酶;DNA聚合酶是在DNA复制过程中,催化形成新DNA分子的酶,是将单个游离的脱氧核苷酸加到DNA片段上,需要模板;但DNA连接酶是将两个DNA片段的两个缺口同时连接,不需要模板,两者作用的化学键相同,都是磷酸二酯键。 ⑸原核生物基因(如抗虫基因来自苏云金芽孢杆菌)可为真核生物(如棉花)提供目的基因。 ⑹限制酶在第一步和第二步操作中都用到,且要求同一
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