第二章 DNA操作基本问题.pptVIP

第二章 DNA操作基本问题 DNA提取 DNA分离纯化 DNA沉淀 DNA检测 分子生物学实验仪器设备 DNA提取 质粒DNA的提取 细菌细胞破碎----碱使染色体DNA变性-----离心分离------收集质粒DNA-----纯化------保存 真核细胞DNA的提取 研磨使细胞破碎-----蛋白酶K去核蛋白----分离蛋白质与DNA------纯化-----沉淀------纯度检测 质粒DNA的提取 DNA纯化 RNA酶去RNA SDS-蛋白复合物 蛋白酶K去蛋白质 酚-氯仿抽提 纯化试剂盒 紫外分光光度计测A260与A280值：1·8 或2·0 SDS的作用 十二烷基硫酸钠，离子型表面活性剂 溶解细胞膜上的脂质与蛋白 解聚核蛋白 与蛋白质结合成复合物 有毒，是一种刺激物，避免吸入粉末 酚与氯仿的使用 酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性，离心后沉淀在下层，而DNA 水溶液在上层。 虽然酚比氯仿变性效果好些，但酚与水相有一定程度的混溶，而氯仿与水不混溶，所以混合使用酚与氯仿比较好。 酚要用Tris-HCl缓冲液饱和，并调PH到8，使DNA更稳定，获得RNA含量较少的DNA样品。 DNA沉淀 二倍体积的无水乙醇与DNA相混合。使乙醇的终含量占67%左右。室温静置30分钟。 乙醇沉淀