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粪便钙卫蛋白检测试剂盒 （酶联免疫法） 货号 EK-CAL 96T EK-CAL2 192T 用途： 瑞士BüHLMANN公司生产的粪便钙卫蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）用于定量检测人粪便中的钙卫蛋白（MRP8/14; S100A8/S100A9）。 产品原理 本试剂盒应用双抗体夹心法，基于不同位点的两种单克隆抗-人钙卫蛋白抗体。标准品、质控品和稀释后的待测样本加入到具有高亲和力的单克隆抗-人钙卫蛋白抗体包被的微孔板微孔内。在第一次孵育步骤中，样本中钙卫蛋白被固相抗体捕获。加入酶联物后第二次孵育时，形成以下复合体：捕获抗体-人钙卫蛋白-酶标抗体结合物。接着加入TMB底物进行显色，加入酸液终止液终止显色反应，溶液变成黄色。黄色亮度与样本中钙卫蛋白浓度成正比。最后在酶标仪450nm波长处测量吸光度。做出标准品浓度对相应OD值的标准曲线，在其上计算出样本浓度。 试剂成分： 试剂 量 编号 说明 提取缓冲液 3瓶，125ml B-CAL-EX 直接使用 微孔板 （预包被钙卫蛋白单克隆抗体） 12*8孔 B-CAL-MP 直接使用 封板膜 3张 浓缩洗涤液（10X） 含防腐剂 1瓶，100ml B-CAL-WB 用900ml去离子水稀释 孵育缓冲液含防腐剂 2瓶，125ml B-CAL-IB 直接使用 标准品1,2 5支，1ml B-CAL-CASET 直接使用 质控品 高值/低值 2支，1ml B-CAL-CONSET 直接使用 酶联物 1支，12ml B-CAL-EL 直接使用 TMB底物 B-TMB12 直接使用 终止液 B-STS12 直接使用 1 钙卫蛋白标准品从A到 E的实际浓度为4,12,40,120和240ng/ml。使用低范围检测程序时（样本用提取缓冲液1:50倍稀释，提取物再用孵育缓冲液1:50倍稀释，共稀释250倍）标准品钙卫蛋白分析浓度分别为10,30,100,300,600ug/g。如使用扩展范围检测程序时（样本用提取缓冲液1:50倍稀释，提取物再用孵育缓冲液1:150倍稀释，共稀释750倍）标准品钙卫蛋白分析浓度分别为30,90,300,900,1800ug/g。 2 标准品和质控品在检测时直接使用，无需稀释。 根据需要可由供应商提供的试剂 粪便提取设备 Smart-Prep 50 支 B-CAL-RD Schebo? Quick- Prep 50 支 B-CAL-SOFI 1.3ml，直接使用 试剂储存条件和效期 未开封试剂 2-8度储存，失效期标注在试剂盒标签上，不要使用超过失效期的试剂盒 已开封试剂 提取缓冲液 2-8度储存，直至失效期 微孔板 未使用的板条立即重新放回装有干燥剂的铝箔袋中，并封上自封口。 2-8度储存，直至失效期 已稀释的洗涤液 2-8度储存，最多6个月 孵育缓冲液 2-8度储存，直至失效期 标准品 质控品 酶联物 TMB底物 终止液 需要但没提供的材料 抽提程序 10ul一次性接种环(Sarstedt: 86.1562.010) 15ml带帽聚丙烯管(Sarstedt: 62.554.502) 层流工作站 多管旋涡混合器 精密天平(10 - 150毫克) 小型离心机（≥3000 g） ELISA程序 10、100及1000ul移液器及配套吸嘴 用于样本稀释的一次性试管 用于稀释洗涤液的1000ml量筒 用于洗板的洗板机或塑料挤瓶 吸水纸 酶标仪（450nm） 注意事项： 安全措施 试剂盒内的微孔板、标准品和校准品还有人源性成分，尽管已经过检测，HBV表面抗原、HCV以及HIV1/2均为阴性，但仍然应视为有潜在传染性的物质对待，遵守实验室规程并采取适当的防护措施。 底物和终止液：TMB底物还有联苯胺、H2O2以及二甲基甲酰胺，终止液含有硫酸（0.25M），这些试剂都会刺激眼睛、皮肤和黏膜，避免试剂接触眼睛、皮肤并穿着合适的防护服、手套、和眼镜。如试剂接触到眼睛和皮肤，应立即用清水冲洗。 未使用的溶液必须按当地法规进行处理。 技术措施 试剂盒组件 不要使用超过标签上所示有效期的试剂盒 不要混合不同批号的试剂 避免试剂、样本和孔间的交叉污染 使用前将试剂恢复到室温并混匀 微孔板不可重复利用 提取 为了获得准确的定量结果，必须将加入到提取缓冲液中的已称重的所有粪便样本变成匀浆。要避免样本残留在管帽处。 样本提取时最短需要5分钟可获得有浑浊的液体，延长离心时间可以减少或消除浊度，但试验表明浊度对ELISA的定量结果无影响。 ELISA过程 为获取可重复的准确结果，清洗步骤是必不可少的。洗涤液加入到每个检测孔后，每次必须至少孵育20秒，洗板次数也要按照要求进行。 如使用自动洗板机，强烈建议使用“板模式”，可缩短孵育时间。 检测板震荡参数：400-60