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第六章 微生物的生长及其控制 生长：原生质与细胞组分的增加；繁殖：菌体细胞数量的增加。 微生物的生长伴随体积增大和细胞分裂，所以，生长的概念中包含着繁殖。 第一节 测定生长繁殖的方法 （二）间接法 比浊法 生长指标法 （一）直接法 血球计数板 平板菌落计数法 一、微生物个体生长和同步生长 同步培养法：能获得处于同一生长阶段 的群体细胞的培养方法 同步生长：运用同步培养技术，控制微 生物生长，使之处于同一生长 阶段并同时分裂。 获得同步生长的方法： 1. 机械法— 收集同样大小的细胞 密度梯度离心： 选择性滤膜法: 2. 调整生理条件法： 温度、光、限制因子等 例：温度开始很低，使其均处在 仅活着的状态——升高温度—— 同步生长 ３. 抑制ＤＮＡ生长法： 加入代谢抑制剂，阻遏DNA 复制——解阻遏——同步 生长曲线： 将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的液体培养基中，在适宜条件下培养，定时取样，测菌量。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。 （1）延滞期（lag phase） 1.现象：活菌数没增加，曲线平 行于横轴。 2.原因：由于细胞进入新环境, 细胞数目无增长，甚至有所下 降有一个适应过程，进行大量 的酶（诱导酶）的生成。 3.细胞特点:细胞的新陈代谢非 常旺盛，个体体积显著增大， 为细胞分裂作准备。 4.此期长短：与菌种遗传特性、菌龄、接种量、培 养条件有关。 5.意义：在实际工作中，缩短lag phase 的措施： 1）加大接种量（群体优势----适应性增强） 2）选用对数期的种子（此时细胞分裂旺盛） 3）调整培养基的成分，使种子基含有发酵培养基的成分 4）选用繁殖快的菌种 （2）指数期(exponential phase) 1. 现象：细胞数目以几何级 数增加，其对数与时间 呈直线关系。 2.细胞特点：此时细胞的  大小、组成、生理特征等 均趋于一致，代谢活跃， 生长速率高，代时稳定。 ２．代时（世代时间Ｇeneration time, G）： 单个细胞完成一次分裂所需要的时间 (3)稳定期（stationary phase): 2. 特点:细胞的菌体形态典型，  芽孢形成，细胞内开始 贮藏物质。 3.出现原因： 4. 意义： 3）生长产量常数： 概念：表示微生物对基质利用效率的高低 Y=菌体干重/消耗营养物质的浓度 根据产量常数可确定微生物对营养物质的需要量 如：Y=0.5，表示要得到5g菌体，需某营养物（葡萄 糖）10g。 （4）衰亡期 1.现象：细胞死亡速率大于生长速率。一般总菌数不变,活菌数曲线下降。 2. 特点：菌体变形，大小 不一，细胞出现自溶,生理代  谢活动停滞。 三、微生物的连续培养 （一）按控制方式分1.恒浊培养 2. 恒化培养 概念：以恒定流速使营养物质浓度恒定而保持细菌生长速率恒定的方法。 原理：恒化器中动态平衡的稳定性，是以某种生长限制因子（如碳、氮源；生长因子；无机盐等）的浓度来控制菌的生长速度。 特点：维持营养成分的低浓度，控制微生物生长速率。主要用于科学研究 (二)按培养器级数分 单级连续培养 微生物代谢产物的产生速率与菌体生长速率相平行 2. 多级连续培养 微生物代谢产物不与菌体生长速率相平行 连续培养的优点 1、缩短发酵周期，提高设备的利用率； 2、便于自控。降低动力消耗及劳动强度； 3、产品均一； 4、节约资源 四、微生物的高密度培养 High cell-density culture, HCDC 一般指微生物在液体培养中细胞群体密度超过常规培养10倍以上时的生长状态或培养技术 特点（1）产品产值高 （2）提高下游工程的效率 （3）生产成本相对降低 HCDC中注意的问题 选取最佳培养基成分和各成分含量 补料：逐量流加 提高溶解氧的浓度 防止有害代谢产物的生成 影响微生物生长的主要因素 一、温度 最高生长温度：微生物生长的最高温度； 最适生长温度：微生物生长最快时的温度 1）最适生长温度不等于积累代谢产物的最佳温度； 2）同类型发酵使用菌种不同，最适生长温度不同； 3）同一微生物不同生理活动的最适生长温度不同。 （二）按最适生长温度