蛋白质工程的崛起(讲课).PPT

玉米中赖氨酸的含量比较低。 赖氨酸的合成机理： 天冬氨酸激酶 二氢吡啶二羧酸合成酶 前体物质 赖氨酸 负反馈调节 天冬氨酸激酶 （352位的苏氨酸） 二氢吡啶二羧酸合成酶 （104位的天冬酰胺） 改造 天冬氨酸激酶 （异亮氨酸） 二氢吡啶二羧酸合成酶 （异亮氨酸） 延长干扰素的体外保存时间 提高玉米中赖氨酸的含量 提高工业生产中蛋白质类酶的稳定性 这些在科学研究和工业生产中亟待解决的难题均无法通过基因工程来完成。于是新一轮的探索拉开了序幕，人们开始着眼于对现有蛋白质的改造，以及制造目前从天然蛋白质中找不到的蛋白质。就这样，蛋白质工程应运而生，并迅速崛起。 二、蛋白质工程的基本原理 根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行分子设计。 1、目标： 思考：对天然蛋白质进行改造，你认为应该直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？ 应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，主要原因如下： （1）任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造，即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。 （2）对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作，难度要小得多。 主要原因：①基因编码蛋白质，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。②容易操作，难度要小得多。 2、原理： 改造基因（基因修饰或基因合成） 逆转录 转录 DNA RNA 翻译 蛋白质 复制 复制 天然蛋白质的合成遵循中心法则 转录 DNA RNA 翻译 肽链 折叠等 具有空间结构的蛋白质 表达生物特有的功能或性状 天然蛋白质的合成过程 遵循中心法则，并需经过高级空间结构的转变 ３.蛋白质工程流程 : 蛋白质 三维结构 氨基酸序 列多肽链 基因 DNA 预期功能 DNA合成 分子设计 mRNA 生物功能 转录 翻译 折叠 图1-29蛋白质工程流程图 途径: 预期的蛋白质功能 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因） * * * 1965年，生物科学界发生了一件轰动全球的大事！ 人工合成了结晶牛胰岛素，这是第一个在实验室中用人工方法合成的蛋白质, 实现了世界上首次人工合成蛋白质的壮举。 一、蛋白质工程的基本概念 二、蛋白质工程崛起的缘由 三、蛋白质工程的基本原理 四、蛋白质工程的进展和前景 一、蛋白质工程的基本概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 蛋白质工程的实质是对编码蛋白质的基因进行改造 20世纪50年代初胰岛素氨基酸序列的测定 60年代初肌红蛋白三维立体结构的建立 70年代初DNA重组技术的问世 这是孕育蛋白质工程于80年代初诞生的三大理论技术基石 1985年Mullis创立的PCR技术以及1994年Stemmer发展的基因改组技术，则为蛋白质工程的深入研究和广泛应用提供了技术上的保障 蛋白质工程的特征是在基因水平上特异性定做一个飞天然的优良工程蛋白。 蛋白质工程主要有两大设计理念: 1、建立在对蛋白质结构与性质之间的对应关系深入理解基础上的分子理性设计。 2、建立在体外模拟自然进化过程基础上的分子定向进化。 1.1蛋白质工程的基本特征 基因工程 基因克隆 DNA序列 定点突变 分子设计 测定三级结构计算机图像 蛋白质结构的分析 酶的纯化生化特性 蛋白质化学 1.2 基因的体外定向突变 在DNA水平上产生多肽编码顺序的特异性改变称为基因的定性诱变。利用这项技术一方面可对某些蛋白质进行定位改造，另一方面还可以确定多肽链中某个氨基酸残基在蛋白质结构及功能上的作用。一般而言，含有单一或少数几个突变位点的基因定向突变可选用下列几种策略。 1.3 蛋白质工程的研究内容及应用 蛋白质是所有生命过程的存在形式，它以高度的特异性直接推动数千种化学反应的进行，并以关键的结构元件组成所有生物体的细胞和组织。 蛋白质工程技术改造或创建新型工程蛋白，还能拓展功能蛋白在工业、农业、医学等领域的应用范围其经济和社会效益不可估量。 （1）通过改变酶的Km和Vm等动力学参数，提高其生化反应的催化效率。 （2）通过提高酶与底物的亲和性，减少生物转化工程中副产物的形成。 （3）通过增强功能蛋白对蛋白酶的抗降解性能，简化其分离纯化工序并提高收率。 1.4 蛋白质工程实施的必要条件 异亮氨酸 半胱氨酸 思考：如果想让某一个生物的性状在另外一个生物的身上表达，常用的方法有哪些？ 1、在种内可以用什么方法？ 杂交育种 2、在种间可以用什么方法？ 基因工程育