病毒感染的检查方法及防治原则.pptVIP

1）掌握标本的采集与送检原则、病毒感染的快速诊断； 2）熟悉病毒感染的免疫预防、抗病毒治疗； 3）了解病毒的分离培养。 docin/sundae_meng 第一节 病毒感染的检查方法 病毒学实验室诊断有三个方面： ①直接检测和分离鉴定； ②检测病毒核酸和抗原成分； ③检测特异性抗体。 docin/sundae_meng 第一节 病毒感染的检查方法 一、标本采集与送检： 1、采集的标本：通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。 （一）供病毒分离培养、检测核酸和抗原 docin/sundae_meng 2、采集原则 （1）时间:在发病初期（急性期）采取，较易检出病毒，越迟阳性率越低。 （2）类型:在感染部位采取。如呼吸道感染采取鼻咽洗漱液或咯痰； （3）运输:冷藏速送。病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。远距离运送，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。 （4）处理：无菌操作；污染检材，加双抗生素或氯仿处理。如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分离。 docin/sundae_meng （二）供血清学检查的标本的采集原则 1、检测特异性抗体需要采取急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后立即采取，第二份在发病后2～3周采取。 2、血清标本放4℃-20℃保存，试验前血清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物质及补体。 3、无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。 docin/sundae_meng 二、形态学检查 电子显微镜（EM）:能观察病毒颗粒的形态和大小。 光学显微镜:能观察病毒感染细胞内的病理变化，如包涵体或多核巨细胞等。 例如，狂犬病病毒感染后可在脑神经细胞浆中检出嗜酸性包涵体，称为内基小体，可辅助诊断狂犬病。 docin/sundae_meng 　三、病毒的分离培养 （一）病毒分离的一般程序是 →鉴定病毒种型(血清学方法) 检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种 易感的动物→出现病状 鸡胚→病变或死亡 细胞培养→细胞病变 docin/sundae_meng docin/sundae_meng （二）分离病毒的鉴定 　1．病毒在细胞内增殖的指征 （1）细胞致病作用(Cytopathogenic effect,CPE):病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断。 （2）红细胞吸附现象 （3）干扰现象 （概念、作用机理、意义） 　2．病毒感染性的定量测定 ： docin/sundae_meng 病毒在细胞内增殖的指标 正常细胞 病变细胞 docin/sundae_meng 干扰现象 概念：两种不同病毒或同种异型病毒、感染同一细胞时，一种病毒抑制另一病毒增殖的现象。 病毒诱导宿主细胞产生干扰素:抑制被干扰病毒的生物合成。 竞争干扰：一种病毒破坏宿主细胞的表面受体，因而阻断另一病毒吸附。 改变宿主细胞的代谢途经：从而阻止第二种病毒的mRNA的合成或其他生物合成过程。 产生缺陷病毒:其基因不能正常复制，但能干扰感染性病毒体的复制，这种缺陷病毒称为缺陷干扰颗粒。 docin/sundae_meng 四、病毒成分（核酸及抗原）的直接检出 （一）直接检出病毒核酸 1．核酸杂交 2．多聚酶链反应 3. 基因芯片技术 （二）直接检测病毒抗原 1．免疫荧光（IF）技术 2．酶联免疫吸附试验（ELISA） docin/sundae_meng ELISA Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity docin/sundae_meng 五、特异性抗体的检测 病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗原免疫应答，特异性抗体效价升高或lgM抗体出现有辅助临床诊断的价值。 （一）补体结合试验（CF） （二）中和试验（NT） （三）血凝抑制试验 （HIA） docin/sundae_meng 光镜-----包涵体 电镜 免疫荧光 ELISA 分子生物学技术 杂交 PCR 六、病毒感染的快速诊断 docin/sundae_meng 第二节 病毒感染的免疫预防 docin/sundae_meng 一、人工主动免疫 人工主动免疫制剂——病毒疫苗： （一）减毒活疫苗 　　是由从自然界或人工突变培育筛选出的致病性减弱或丧失的病毒突变株制备而成的疫苗，如脊髓灰质炎活疫苗。 （二）灭活疫苗 是利用某些理化因素处理活病毒，使其失去感染性后制备而成。如乙型脑炎灭活