酶法破碎微生物细胞的研究综述0902011024胡良秀.docVIP

第 PAGE 1页 酶法破碎微生物细胞的研究综述 09生工一班 胡良秀 0902011024 摘要:酶法细胞破碎技术不仅能提高胞内产物的提取效率、降低能耗，还能减少化学试剂的用量,有利于环保。酶作为一种生物催化剂，在提取中，对细胞壁的有效成分进行分解破坏，从而降低传质阻力，提高提取率；可改变目标产物的生理生化性能，优化产物效用，并且酶法提取操作简单，条件温和，环保无毒，现已将其用于各种细胞内物质的提取过程。本文主要介绍酶法破碎细菌、真菌、微藻、原生菌类等微生物细胞的研究进展、工业化情况以及应用展望。 关键词:酶法破碎；微生物细胞壁；裂解酶；联用；展望 1、前言 微生物是许多有价值的酶、蛋白质、高附加值的多不饱和脂肪酸等的重要来源, 而大部分的代谢产物存在于细胞内,要获得这些物质,可以通过基因工程改造细胞，或者通过物理、化学或生物的方法破碎细胞,释放胞内产物。工业上最常采用的手段是凭借固体剪切力(珠磨)和液体剪切力(高压均质)进行大规模的细胞破碎。但是,酶法细胞破碎技术的条件温和、设备简易、利于环保等优势无与伦比,因此,国内外的专家学者在这一领域进行了一系列广泛而深入的研究。酶法细胞破碎技术从提出至今已有50多年的历史，直至20世80年代后期,多酶种投入了工业化生产；酶的生产成本不断下降, 终为酶法大规模破碎细胞的研究奠定了坚实的基础。根据文献报道, 自溶、噬菌体裂解和外用酶是3种主要的酶法破碎。自溶主要应用于酵母的破碎，大肠杆菌可利用噬菌体裂解，而外用酶法的使用范围更广,更有普适性。 正文： 2、 酶法破碎微生物细胞的原理 存在于微生物细胞内的代谢产物,只有破碎其细胞壁和细胞膜,才能获得最大程度的释放。通常细胞壁较坚韧,细胞膜强度较差,易受渗透压的冲击而破碎,所以,破碎的阻力来自于细胞壁。细胞壁是由纤维素、半纤维素、果胶质等物质构成的致密结构选用合适的酶(如纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶)对中药材进行预处理，能分解构成细胞壁的纤维素、半纤维素及果胶，从而破坏细胞壁的结构，产生局部的坍塌、溶解、疏松，减少溶剂提取时来自细胞壁和细胞间质的阻力，加快有效成分溶出细胞的速率，提高提取效率，缩短提取时间。 3、酶法破碎微生物细胞 3.1 酶法破碎细菌细胞 细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖,作用于细菌细胞壁的溶菌酶可分为三大类 : (1) N?乙酰氨基己糖苷酶; (2) 酰胺酶; (3) 内肽酶。不同来源的溶菌酶有不同的抗菌范围, 并对不同类型的肽聚糖有特异性。 革兰氏阴性细菌的细胞壁除了肽聚糖以外，还有一层脂多糖。EDTA 作为一种螯合剂，能够使含有金属离子的蛋白质具有水溶性，细胞破碎时,加入 EDTA 能破坏脂多糖的结构稳定性。在优化的条件下, 溶菌酶的添加量为湿菌体的 0.2%, 30°C 酶解 1 h、500 W 超声破碎50 次，所得包含体的纯度57%。降解细胞壁的骨架后，需经过超声处理使细胞碎片减小,提高了包涵体的纯度，有利于重组蛋白的进一步纯化。对于细菌胞内的贮藏颗粒, Kshama L 等人[1]使用可产生溶菌酶的小双孢菌的培养液的上清滤液对灭活后的苜蓿根瘤菌进行水解,提取胞内的聚羟基烷基酸酯(PHA)。研究还发现：主要是上清滤液中的蛋白酶参与了PHA 的提取，这说明蛋白酶也能较好地提取细菌的胞内产物 。 Fernanda MK[2] 使用蛋白酶提取纯化Ralstonia eutropha DSM545 生产的 PHB。结果显示, 同等条件下，胰酶处理所得的 PHB 的纯度比菠萝蛋白酶处理所得的要高一些，但胰酶的成本仅为菠萝蛋白酶1/3，这对于工业生产中成本的节约有一定的借鉴作用。因此，使用酶法回收和纯化PHB 等细菌胞内的生物性聚合物具有潜在的应用价值。 3.2 酶法破碎真菌细胞 酵母的细胞壁分为两层，外层由磷酸甘露糖和蛋白质组成, 内层β-葡聚糖构成细胞壁的骨架。真菌细胞壁的溶菌酶主要分为两类: (1) 几丁质酶:主要用于真菌细胞壁的降解和重组，一些几丁质酶也具有溶菌酶活性。(2) β-葡聚糖酶：包括β-(1,3)葡聚糖酶, β-(1,6)葡聚糖酶和甘露聚糖酶等，可以对几丁质酶降解真菌细胞壁起到显著的协同作用。 β-葡聚糖酶与磷酸甘露糖酶及蛋白酶联合作用, 可使酵母细胞壁的内外两层同时破碎, 从而显著提高破壁效果。Trond S 等人[3]考察了混合酶(蛋白酶、几丁质酶和葡聚糖酶)对红酵母细胞壁的破碎程度和压榨温度对膨化鱼饲料生产中虾青素的稳定性和异构体形成的影响。结果显示,在含酶45%裂解的红酵母溶液中回收的虾青素产量比含酶97%所得的虾青素产量增加 8%。因此，我们在实际的酶法破碎操作中除了要确保目标产物的质量外，还要考察一下其他副产物和菌渣等的可利用性, 及其对后续提取的可操作性的要求，进一步提