高效液相色谱法教学课件.PPT

化学键合固定相的特点： （1）传质快: 表面无深凹陷。 （2）寿命长: 化学键合，耐流动相冲击； 稳定。 （3）选择性好: 可键合不同官能团，提高选 择性 （4）有利于梯度洗脱。 由于产生弱极性固定相，因而扩展了反相色谱分离技术的应用。反相色谱﹥正相色谱 存在着双重分离机制： 由键合基团的覆盖率决定 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主。 常用反相键合固定相： C18、C8 P300～P302 反相色谱保留机理 两种观点: ①疏溶剂理论 （溶质与极性溶剂疏远） ②双保留机理 （残留羟基） 影响溶质保留的因素 ① 流动相 组分的保留随流动相极性的减少而减少, ln k’ ? H2O % , 有机溶剂% 增大, 极性下降, k’值随之下降。 思考：在ODS柱上，用70%甲醇/水或60%甲醇/水洗脱苯系物，哪一种流动相使苯系物的保留值大，为什么？ ② 键合固定相： 　a.烷基覆盖量增加，k’值随之增大。 b.烷基链长增加, k’值随之增大。 思考： 同样是70%甲醇流动相，苯在C18比C8柱上的保留值大，为什么？ ③ 溶质 ● 非离子化合物：极性大, k’值小 ● 非极性化合物：分子表面积大, k’值大 ● 同系物：链长增大, k’值增大 ● 苯系物：环数增大, k’值增大; ● 若化合物的非极性部分相同, 极性官能团增 加, 则k’值下降 ● 几何异构体：能形成内氢键的异构体的化合 物 k’值大。 碳链增大 疏水性增大 保留越大 流动相极性增大，保留增大 反相色谱中流动相选择 水＋有机改善剂 常用：甲醇、乙腈、四氢呋喃、二氧六环 极性：有机改善剂＜水 洗脱能力：有机改善剂＞水 极性顺序：甲醇＞乙腈＞二氧六环＞四氢呋喃 洗脱能力：水＜甲醇＜乙腈＜二氧六环＜四氢 呋喃 反相键合相色谱的优点： ①流动相可选用水溶性 ⅰ 样品的溶解度范围提高 ⅱ 流动相可变性大 ⅲ 柱重现性好 ②固定相表面化学能低 ⅰ平衡容易 ⅱ梯度洗脱 ③固定相选择多 ④固定相耐溶剂冲洗 ⑤热稳定性好 缺点： ①流动相PH范围要控制（PH＝2－8） pH太低：Si-C键易断裂 pH太高：硅胶基质易溶解 ②游离的硅羟残基影响分离（封尾） P328-331 思考 烷基苯同系物分离分析 多环芳烃分离分析 出峰顺序？ 如何选择色谱条件？ 如何优化分离？ 第四章、离子交换色谱，离子对色谱 离子交换色谱： 适用于离子型物质的分离和分析 §4-1 离子交换色谱 一.原理：用离子交换剂作固定相，以具有一定pH值的缓冲溶液作流动相，样品中各离子依据它们与离子交换剂的交换能力大小来进行分离的色谱方法。 原理：流动相(溶质离子)+离子交换剂(反离子) Ｒ－Ａ＋Ｂ≒Ｒ－Ｂ＋Ａ 平衡时，平衡常数为 控制k’可以改变流动相的离子强度注：只有当溶质呈离子状态时，才能在离子  交换柱上有保留(流动相pＨ和溶质ＰＫａ都是很重要的参数) 二、离子交换剂 阳离子交换剂——带负电荷官能团 -SO3-(磺酸型）、 -COO-(羧酸型）  阴离子交换剂——带正电荷官能团 －NH3＋（氨基型）、－NR3＋（季胺型） 常见：硅胶为基体的键合相离子交换剂 例 pH对交换容量的影响： ①强酸、强碱性离子交换剂，交换性能不受pH影响，交换容量恒定。 ②弱酸性阳离子交换剂，在较高pH条件下 弱碱性阴离子交换剂，在较低pH条件下 发生离子交换 pH与交换容量关系图 三、离子交换色谱的影响因素 ①流动相PH的影响 例：弱酸 ：HA≒H++A- PH↓→[A-] ↓→交换能力↓→tR↓ PH↑→[A-] ↑→交换能力↑→tR↑ 弱碱：-NH2+H+≒-NH3+ PH↓→[NH3+] ↑→交换能力↑→tR↑ PH↑→[NH3+] ↓→交换能力↓→tR↓ 对分离不同PKa的酸碱是个有利因素 例 ②流动相中反离子的 形式和浓度 交换平衡常数KB/A： 反映了溶质和交换剂的亲和力大小 亲合力影响因素： a.电荷数↑→亲合力↑ b.离子的水合体积↓→亲合力↑ c. 离子极化率↑→亲合力↑ 对磺酸型阳离子交换树脂， 一价阳离子的洗脱强度顺序： Cs+Rb+ K+NH4+ Na+H+ Li+ 二价阳离子的洗脱强度顺序：