蛋白质的测定使用凯氏定氮法解说.pptVIP

3、自动凯氏定氮法 1.原理 同常量凯氏定氮法 2.主要仪器 自动凯氏定氮仪：该装置内具有自动加碱蒸馏装置，自动吸收和滴定装置以及自动数字显示装置。 消化装置：由优质玻璃制成的凯氏消化瓶及红外加热装置组合成的消化炉。 3、试剂 除硫酸铜与硫酸钾制成片剂外，其他试剂与常量测定相同。 4、优点 灵敏、准确、快速以及用量少 准确称取某乳粉样品0.800克，经凯氏法消化定容至100ml，移取5ml消化液进行蒸馏，用20ml硼酸吸收，再用0.05000mol/lHCl滴定，结果消耗5.00ml，试计算该乳粉的蛋白质含量？ 试述蛋白质测定中，样品消化过程所必须注意的事项，消化过程中内容物颜色发生什么变化？为什么？ 样品经消化进行蒸馏前，为什么要加入氢氧化钠？这时溶液发生什么变化？为什么？如果没有变化，说明什么问题？须采用什么措施？ 子项目二 14酱油中氨基酸态氮的测定 （GB/T 5009.39-2003 ） 任务一：相关仪器设备及试剂的准备 仪器设备：碱式滴定管、移液管、200mL烧杯、100容量瓶、酸度计、磁力搅拌器、滴定台 试剂：浓度为36%中性甲醛；氢氧化钠标准溶液：0.05mol/L（需临用前标定） 任务二：成分分析 1.原始记录表格的设计 项目名称 检测日期 样品名称 检验依据 样品滴定次数 加甲醛前 加甲醛后 空白滴定V2 初读数 末读数 消耗体积 初读数 末读数 消耗体积V1 1 2 氨基酸态氮含量X（g/100mL）= 平均值 精密度 2.样品中游离酸中和 吸取5mL试样→100mL容量瓶中→定容→混匀后吸取20.0mL→200mL烧杯→加水60mL→插入酸度计的指示电极和参比电极→开动磁力搅拌器→0.050mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2→记录消耗体积 3.滴定样品中氨基酸酸基含量 上述烧杯→加入10mL甲醛溶液→混匀→再用0.05mol/L氢氧化钠标准的溶液继续滴定至pH9.2→记录消耗体积V1 【拓展】 本法原理： 氨基酸含有酸性的-COOH和碱性的-NH2，它们相互作用使氨基酸成为中性的内盐，不能直接用碱液滴定它的羧基。当加入甲醛时，氨基与甲醛结合，其碱性消失，使羧基显示出酸性，这样就可以用氢氧化钠溶液滴定-COOH，并用间接法测定氨基酸的总量。 4.空白试验 取80mL蒸馏水→200mL洁净烧杯→先用氢氧化钠标准溶液滴定pH8.2→加入10.00mL中性甲醛溶液→用氢氧化钠标准溶液（0.050mol/L）滴定至pH9.2→记录消耗体积V2 5.数据处理 精密度：在重复性条件下的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 任务三：试验器具的清洗整理 知识回顾Knowledge Review * 0.20-2.00g 项目七食品中蛋白质及氨基酸态氮的测定 【学习目标】 1、掌握食品中氮含量与蛋白质含量之间的换算。 2、掌握凯氏定氮装置的搭建技术。 3、掌握蛋白质的测定技术。 【基础知识】 1、蛋白质及氨基酸概述 蛋白质由两性氨基酸通过肽键结合在一起的大分子化合物，它主要含的元素是C、H、O、N。 一般来说，pro的平均含氮量为16/100，既一份氮相当于6.25份蛋白质，此数值称为蛋白质系数。 所以在用凯氏定氮法定量pro时，将测得的总氮%乘上pro的换算系数K=6.25即为该物质的pro含量。 注意： ①含N是蛋白质区别其他有机化合物的主要标志。 ②不同种类食品的蛋白质系数有所不同，如玉米、荞麦、青豆、鸡蛋等为6.25，花生为5.46，大米为5.95，大豆及其制品为5.71，小麦粉为5.70、全小麦、大麦、燕麦、裸麦和小米是5.83；硬果类为5.30；牛乳及其制品为6.38。 2、原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸胺。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。 氨基酸～HCl～N 〖注意〗 此法测定得到的蛋白质含量，实际上包括核酸、生物碱、含氮类脂、叶啉和含氮色素等非蛋白质氮化合物，故称为粗pro。 3、适用范围 国家标准第一法 适用于各种食品中蛋白质的测定 4、任务分解 任务一：湿法消化 任务二：碱法蒸馏 硼酸吸收 任务三：盐酸滴定 任务四：数据记录与计算 任务一：湿法消化 子任务1：仪器及试剂的准备 仪器： 子任务1：仪器及试剂的准备 试剂 作用 硫酸铜 a催化作用：加速有机物的氧化分解。 b消化完全的指示剂：蓝绿色，澄清，透明； c蒸馏时碱性反应的指示剂：变深蓝色或产生黑色沉淀 硫酸钾 提高溶液沸点，从而加快有机物分解 浓硫酸 氧化作用：有机物质氧化分解为H2