免疫组化在血液肿瘤病理诊断中的应用及意义(一).pdfVIP

免疫组化在血液肿瘤病理诊断中的应用及意义（一） IHC 方法相对简单，但从取材到发报告之间环节较 多，任何环节的疏忽都可能造成检测结果偏差，甚至导致漏 诊、误诊。除 IHC 染色常规注意事项外，血液肿瘤标本的检 测还有其特殊性。 1.标本的前期处理 血液系统疾病病理诊断标本，主要是淋巴结、脾脏和骨 髓组织。与其它组织相似，造血细胞表面抗原不同其稳定性 会有差异，从而对固定剂的耐受性不同。组织固定的原则， 是采用 10%中性福尔马林作为固定剂， 固定时间最好不超过 24 小时。 (1)淋巴结：取材后迅速固定， 待组织表面变硬即可修块。 以淋巴结大小为直径， 厚度不超过 3mm ，以使组织得到充分 的固定。如淋巴结中有淤血、坏死成分，应尽量除去。组织 制片中的每个步骤都应严格掌握，以免破坏组织的抗原活 性。 (2)脾脏：脾脏组织较大，应注意多点取材；脾脏又 是贮血器官，含血量多，取材时应尽量除去积血；取材大小 以 2 ×2 ×7.5px 为宜，取材后尽快固定。在多块标本中，病 理医师应根据 HE 切片，挑出病变明显的 1～2 块作 IHC 染 色。 (3)骨髓组织：特点为组织小，主要为骨质，造血细 胞充斥于骨小梁之间。在组织制片的每个步骤都应相应缩短 时间。骨髓组织制片需要脱钙，酸性脱钙液对抗原活性有影 响，常规采用的 2%硝酸， 脱钙不应超过 3 小时。 EDTA 脱钙 液偏碱性，比较温和，效果较好，只是时间长，约需 24～48 小时。 (4)骨髓涂片：某些情况下当骨髓组织取材不好， 如太小或组织为骨皮质、血凝块等不能进行石蜡包埋制片 时，可用骨髓涂片代替。但注意骨髓涂片不能太厚，最好不 混血。涂片稍干后用甲醇：丙酮 (1：1)固定 90 秒后染色。涂 片不能在室温下久存。 (5)外周血涂片：某些特殊情况不 能采用穿刺骨髓取材时，可用外周血涂片代替。前提是外周 血有核细胞总数必须较多，结果才相对可靠，固定同骨髓涂 片。 (6)组织印片：当疾病诊断和分型必需的标记物不能 用于石蜡切片时，可用组织印片来补救。将新鲜软组织取材 后，按取材大小平放于干净的载玻片上，轻压，然后垂直取 下标本，组织表面的细胞即印在玻片上，风干，固定同骨髓 涂片。组织印片与冰冻切片相似，由于形态不好，除特殊情 况外，临床上尽量不用。 2.IHC 所采用的检测系统 IHC 染色方法很多， 如免疫荧光、 免疫酶标、 免疫金标。 免疫酶标是以酶标记的抗体与组织或细胞作用后，加入酶的 底物生成有色产物，通过光镜对细胞表面或细胞内抗原进行 定位。免疫酶标以其标记酶不同又分为标记过氧化物酶 (HRP) 法，如 ABC 、SP 及相应二步法；标记碱性磷酸酶 (AP) 法， 如 SAP 及相应的二步法。葡萄糖氧化酶 (GOD) 分子量较大， 具有较多的氨基酸，在标记时易形成广泛的聚合，影响酶活 性，现已较少使用。目前最常用的是 SP、SAP 及二步法。 脾 脏、淋巴结切片 IHC 染色可采用 SP 及相应的二步法， DAB 显色。此法敏感性高，阳性定位准，保存时间长。而骨髓中 的红细胞、粒细胞、单核组织细胞含有丰富的内源性 HRP、 H2O2 处理效果不理想，可造成非特异着色而影响结果的分