第五章核苷酸-149版.pptVIP

核酸的作用：生物信息的储存和传递 核酸的发现和研究简史 1869年，一位年轻的瑞士医生用盐酸处理脓细胞以获得细胞核用于研究核的化学成分。当用酸继续处理时有白色沉淀出现，沉淀中含碳、氢、氧、氮和高浓度的磷。先命名为核素，后发现它有很强的酸性，改称核酸。后来被证明是脱氧核糖核酸（DNA）。 之后不久 Hoppe-Seyler从酵母中分离出一种类似的物质，即核糖核酸（RNA）。 核酸的定义： 核酸是生物体内一类含有磷酸基团的生物大分子 1953年Wasten 和 Crick 提出DNA双螺旋结构模型，说明了基因的结构、信息和功能三者之间的关系，为分子生物学的发展奠定了基础。 在DNA切割技术、分子克隆（PCR）和快速测序三项关键技术的基础上，20世纪70年代前期诞生了DNA重组技术。 发明PCR技术 伯格（美）DNA重组技术之父 人类基因组计划（1990.10.1-2001.2） 23对染色体、31.647亿个碱基、3-3.5万个基因 人类细胞中的染色体 基因：一段编码蛋白质或RNA的DNA序列。 第五章 核苷酸 碱基 核苷 核苷酸 碱基 嘧啶 胞嘧啶 (DNA, RNA) 尿嘧啶 (RNA) 胸腺嘧啶 (DNA) 嘌呤 腺嘌呤 (DNA, RNA) 鸟嘌呤 (DNA, RNA) 嘧啶环和嘌呤环的编号以及各种碱基的化学结构 碱基几乎不溶于水，这与其芳香族的杂环结构有关。 互变异构（产生突变的可能） 酸碱解离 强烈的紫外吸收，其最大吸收值在260nm。 碱基的互变异构 茶碱和咖啡因的化学结构 核糖和脱氧核糖 差别：- 2-OH vs 2-H 这种差别影响到二级结构和稳定性。 嘌呤核苷或嘌呤脱氧核苷以C1 ˊ －N9相连。 嘧啶核苷或嘧啶脱氧核苷以C1 ˊ －N1相连。 核苷是由戊糖和碱基通过β-N糖苷键形成的糖苷。 嘧啶核苷和嘌呤核苷的化学结构 X衍射法已证明：核苷中的碱基与糖环平面互相垂直。 核苷 核苷是由戊糖和碱基通过β-N糖苷键形成的糖苷。核苷中的戊糖有D-核糖和2-脱氧-D-核糖两种，它们都以呋喃型环状结构存在。前者形成核糖核苷，后者形成脱氧核苷。核苷中的糖苷键由戊糖的异头体C原子与嘧啶碱基的N1或嘌呤碱基N9形成。为了避免碱基环上原子的编号与呋喃糖环上原子编号混淆，在呋喃环上各原子编号的阿拉伯数字后需加“′”. 在核苷中，碱基在糖苷键上的旋转受到空间位阻的限制。结果核苷和核苷酸能以顺式和反式两种构象存在。顺式核苷的碱基与戊糖环在同一个方向，反式核苷的碱基与戊糖环在相反的方向。 由于嘧啶环O2和戊糖环C5′之间的空间位阻，嘧啶核苷通常为反式构象。嘌呤核苷可采取两种构象。自由的嘌呤核苷（特别是鸟苷）更容易形成顺式构象，但是，DNA和RNA螺旋中的嘌呤核苷主要为反式构象。 几种修饰核苷 S-腺苷甲硫氨酸 常见的核糖核苷酸的化学结构 磷酸酯 自然界的核苷酸多为核苷-5′-磷酸 AMP、ADP和ATP 成酐反应 单磷酸酯 核苷二磷酸 核苷三磷酸 成酐反应 pppGpp 鸟苷-5‘-三磷酸-3’-二磷酸 黄素 腺嘌呤二核苷酸 尼克酰胺 腺嘌呤二核苷酸 辅酶A(CoA) 泛酸 环核苷酸的化学结构 核苷酸的生物功能 能量货币，通常是ATP，有时使用UTP（糖原合成）、CTP（磷脂合成）和GTP（蛋白质合成）； 核酸合成的前体：NTP→RNA，dNTP→DNA； 信息传导，例如cAMP和cGMP作为某些激素的第二信使，鸟苷酸能构调节G蛋白的活性； 作为其它物质的前体或辅酶/辅基的成分，如ADP为辅酶I和II的组分，鸟苷酸作为第一类内含子的辅酶； 活化的中间物，如UDPGlc和CDP-乙醇胺分别参与糖原和磷脂酰乙醇胺的合成； 作为酶的别构效应物参与代谢的调节，如ATP为磷酸果糖激酶-1的负别构效应物，AMP作为糖原磷酸化酶的正别构效应物; 调节基因表达。例如鸟苷-5‘-二磷酸-3’-二磷酸（ppGpp）和鸟苷-5‘-三磷酸-3’-二磷酸（pppGpp）参与调节原核细胞蛋白质的合成。 核苷酸紫外吸收特性 核苷酸的碱基具有共轭双键结构，在260nm处左右有最大光吸收。 核苷酸定量分析： 核苷酸的解离性质 解离基团：第一磷酸基、第二磷酸基、碱基 pH3.5buffer，第一磷酸基全部解离，第二磷酸基尚未解离，碱基解离差异明显；核苷酸带负电，电泳向正极移动；UMPGMPAMPCMP 碱基碱性极弱 核苷酸 核苷酸是核苷的戊糖羟基的磷酸酯。核糖核苷的磷酸酯为核糖核苷酸，脱氧核苷的磷酸酯为脱氧核苷酸。理论上，核苷的5′-OH、3′-OH和2′-OH均可以被磷酸化而分别形成核苷-5′-磷酸、核苷-3′-磷酸和核苷-2′-磷酸。但是，自然界的核苷酸多为核苷-5′-磷酸。 核苷单磷酸（NM