干细胞生物学（胚胎干细胞）.pptVIP

胚胎干细胞与成体干细胞 　胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES 细胞) 是具有增殖、自我更新、分化潜能最大，可分化成为三个胚层所有细胞类型的原始细胞。 一、胚胎干细胞的一般特征 （一）???? 生物学特征 1.形态特征 圆形，细胞体积较小，直径约15～20μm，核大，核质比高，有一个或多个核仁，核仁清晰。 细胞中常染色质多，胞质结构简单，胞质中散在分布着大量核糖体和线粒体，核型正常。 细胞表面微绒毛多，表现出幼稚细胞的特性 2、生长特征 体外的增殖力非常强 ，细胞增殖迅速，人ES细胞每18-36h分裂增殖1次，小鼠12h, 存在时，可保持未分化状态，连续无限传代的能力. 此外，其还可以在体外进行选择、操作、冻存。冻存的细胞可在需要时随时解冻，继续培养不失其原有特性，并且来自一个克隆的细胞具有同样的特征。 在抑制分化培养条件下，人ES细胞呈集落样（克隆样）生长，细胞间紧密堆积，无明显的细胞界限，形似鸟巢。 无特殊培养条件时，则会自动分化为多种类型细胞。 表面标记 人胚胎干细胞表达早期胚胎细胞、畸胎瘤细胞的表面抗原——胚胎阶段特异性抗原（staye-specific embryonic antigen，SSEA） 不同种属，不同时期的胚胎干细胞所表达的SSEA有差异。 小鼠ES细胞表达SSEA-1，不表达SSEA-3，SSEA-4； HES细胞则表达SSEA-3，SSEA-4等表面抗原SSEA常作为ES细胞鉴定的一个标志。 人、鼠、猴多能干细胞表面抗原比较表 标记名称 鼠ES/EC/EG 猴ES细胞 人ES细胞 人EG细胞 人EC细胞 SSEA-1 + - - + - SSEA-3 - + + + - SSEA-4 - + + + + TRA-1-60 - + + + + TRA-1-81 - + + + + 其他分子标志 胚胎干细胞标记物: 高表达Oct－4 ， Nanog 等多能性分子标记 ES细胞表达碱性磷酸酶（AKP） 具有端粒酶活性 其他标志：干细胞因子 ，CD30，高分子糖蛋白 ES细胞向造血细胞方向分化 ES细胞向造血细胞方向分化 ES细胞向骨髓间充质细胞方向分化 形成嵌合体动物 参与宿主胚胎发育，并形成嵌合体动物，这是ES和EG的最基本的特征。 把胚胎干细胞注入同品系动物的胚泡内，胚胎干细胞能与宿主胚胎内细胞团融合在一起，共同发育成完整个体， 方法有： 1、胚胎聚集法： (1)将两个宿主的8细胞期桑葚胚置入铺有琼脂层上小孔内的培养皿中， (2)然后将3－5个ES或EG组成的细胞团置入这桑葚胚之间，确保ES或EG与桑葚胚粘附在一起， (3)体外培养，使其发育至胚泡期， (4)选择发育良好的胚泡转移至假孕母鼠子宫内，使其着床，进一步发育形成嵌合体动物。 2、显微注射法： 将8－10个ES或EG直接注射入宿主发育4d的胚泡，待胚泡发育后转移入假孕母鼠的子宫内，继续发育。 3、ES移植入宿主皮下，仍然保持旺盛的细胞增殖能力，但是发育程序失控，表现为无序的细胞分化，成为排列杂乱的，由多种类型分化细胞组成的瘤性组织. 嵌合体检测 检测胚胎干细胞在嵌合体中表达的遗传标记 皮毛色泽： 皮毛色泽的嵌合便于检测。 磷酸葡萄糖异构酶(glucose phosphate isomerase,GPI) 的同工酶检查： 通过电泳分析磷酸葡萄糖异构酶同工酶带谱，即可确定胚胎干细胞在各组织器官(包括生殖腺)中的嵌合情况。 胚胎干细胞的分离和培养 干细胞的获得及培养 人类胚胎干细胞 （human embryonic s