色谱分离技术9灌注色谱教学课件.pptx

色谱效能问题1;;;灌注层析技术Perfusion Chromatography;;Perfusion Chromatography;;;;灌注层析的介质;色谱的效能问题2;毛细管色谱柱;毛细管柱的特点;毛细管柱的选择;;;;气相色谱;;气相色谱分析流程;气相色谱仪组成;;;;;;;;气相色谱的应用;;高效液相色谱法 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) ;高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较;;气相色谱与HPLC的比较;;;HPLC的组成;;;;;;;;分子印迹;概述;分子印迹的基本过程;分子印迹聚合物制备过程;模板分子（印迹分子）;功能单体：;;;分子印迹聚合物的特点;影响分子印迹吸附的因素;;;;;;;;分子印迹固相萃取技术;分子印迹膜分离技术;;;生物大分子印迹面临的挑战;;;电泳分离技术;;电泳的主要影响因素;;; ;;;电泳的分类;;醋酸纤维素薄膜电泳;;;凝胶电泳;;;;;质粒电泳;聚丙烯酰胺凝胶电泳;;聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好；;;丙烯酰胺凝胶聚合原理;;丙烯酰胺的聚合;影响聚合反应的各种因素： ? 催化剂的浓度： 应选择合适的AP和TEMED浓度使聚合时间控制在30—60min内较好，过量的催化剂和加速剂会引起烧胶和蛋白质条带的畸变。 ? pH ： TEMED只能以游离碱的形式发挥作用，在酸性条件下，叔胺缺少自由碱基，引发AP产生自由基的过程会被延迟，聚合时间延长。;;聚丙烯酰胺凝胶的一些相关概念;交联度;;聚丙烯酰胺凝胶电泳的连续性;不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;2. 缓冲液离子成分的不连续性, （等速电泳） 体系中含三种离子。走在最前面的称为快离子或前导离子。走在最后的称为慢离子或尾随离子。;快离子和慢离子间形成一个稳定的迁移界面，形成三种离子移动界面，蛋白质离子夹在中间，被浓缩成一薄层。 ;;;;;SDS;SDS的主要影响因素;;;等电聚焦电泳;;;pH梯度的形成;理想的载体两性电解质应具备的特征：;载体两性电解质的合成;㈠没通电时的变化 所有的载体两性电解质分???都荷电，只是溶液中荷正电和荷负电的基团数目相等，净电荷为零。;;电解槽中，通电后，正负两极都会发生电 极反应： 正极端反应：6H2O→O2+4H3O++4e- 负极端反应：4H2O+4e-→2H2+4OH-;;;;;;;; 安马西亚商品名为Immobiline。它的结构式是： O H ︱ ︱ CH2 〓 CH — C — N— R (R代表羧基或第三氨基) Immobiline分子的一端是一个双键，可以在聚合过程中通过共价结合镶嵌到聚丙烯酰胺介质中。所以即使在电场中，也是“固相”的。; 在分子的另一端是一个缓冲基团R，R为弱酸或弱碱，它可以在聚合物中形成弱酸或弱碱的缓冲体系。 固相pH梯度与载体两性电解质pH梯度的区别在于前者的分子不是两性分子，在凝胶聚合时候便形成pH梯度，不随环境电场条件的改变而改变，后者是两性分子，在电场中迁移到自己的等电点后才形成pH梯度。固相pH梯度等电聚焦比传统等电聚焦具有更高的分辨率，更大的上样量，其分辨率可达到0.001pH，是目前分辨率最高的电泳方法之一。 ;等点聚焦电泳的应用 ;双向电泳