肿瘤研究方法-Approaches-and-Techniques说课讲解.pptVIP

Approaches and Techniques in Research on Tumor A course for Ph.D. candidates;肿瘤的实验动物和细胞研究技术; 体外研究(In Vitro ) 原代培养肿瘤细胞: 从肿瘤组织中分离得到的细胞在体外成功地进行 培养称为原代培养(primary culture) 肿瘤细胞系:原代培养肿瘤细胞能连续传代（约7～10天传代一次） 半年以上,生长稳定, 并能保持肿瘤细胞的特性， 称为肿瘤细胞系(cell line) 肿瘤细胞株:细胞系经细胞克隆或其它方法获得具有某种生物学特性 的纯谱系的细胞称为肿瘤细胞株(cell strain), 细胞具有 相同的基因型和表型(单克隆) ;肿瘤细胞株的建立： 1、 直接从人的肿瘤或动物的自发及诱发肿瘤组织分离培养 建系和建株; (从自发或诱发瘤) 2、从人或动物的移植肿瘤(如人肿瘤裸鼠移植瘤)组织分离 培养建系及建株; (从移植瘤) 3、用化学或生物(病毒)方法在体外转化正常的人或动物的 细胞株而获得肿瘤细胞株。(体外转化) ;; 3.? 核型及染色体观察: 整倍体,异倍体,染色体畸变、标记染色体,染色体分带分析, 相隔一定时间重复观察数次 4.生长特性: 分裂指数（[3H]-thymidine或5-BrdU的labeling index）、 生长曲线、 细胞群体倍增时间、 集落形成或贴壁率（plating efficiency） 半固体培养介质中的集落形成率 5.组织特性的鉴定: 免疫细胞化学方法 ; 上皮性肿瘤标志: CK、上皮膜抗原（EMA）、 癌胚抗原（CEA）; 淋巴瘤抗原标志: 人白细胞分化抗原簇（CD）,有274个以上, T淋巴细胞: UCHL-1(CD45RO), B淋巴细胞: L26（CD20）, 软组织肿瘤标志：波形蛋白（Vm） 肌源性：结蛋白（Dm）、肌动蛋白、肌凝蛋白、肌红蛋白 神经源性： 神经微丝（NF）、S-100蛋白、 Leu-7、 神经元特异性烯醇化酶（NSE）、髓磷脂碱性蛋白(MBP) 组织细胞源性： α-1抗胰蛋白酶、 α-1抗糜蛋白酶、CD68 血管源性：八因子相关抗原、CD34、荆豆凝集素(UL) 基膜源性：纤连蛋白（FN）和层粘连蛋白（LN） 体外培养时肿瘤细胞株有可能会失去原本表达的某些组织抗原,抗原标志要多选用几种抗体,以减少假阴性结果; ; 6. 其他特性： (a) 分泌激素和异位激素: 绒毛膜癌→HCG 垂体瘤→生长激素 肺燕麦细胞癌和一些甲状腺癌→ACTH 人肺巨细胞癌细胞株（PLA-801）→促性腺激素 肝癌→HCG (b)??? 肿瘤细胞的受体表达: ER PR AR (c)??? 酶及同工酶活性: 酶活性保持(HTC→酪氨酸氨基转移酶)、变化 诱导剂 糖皮质激素、多肽激素 改变培养条件：谷氨酸替代谷氨酰胺→脑星形胶质细胞谷氨酰合成酶 活性增7倍左右 特异的同工酶谱： 绒癌T3M-3表达胎盘性碱性磷酸酶