第3节 液相色谱法.ppt

1958年 氨基酸分析仪 （离子交换色谱的主要应用） 1975年，离子色谱产生（解决检测上的问题） 3.3.3、离子交换色谱 离子交换色谱 此法是利用离子交换原理和液相色谱技术相结合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、氨基酸、核酸等。 * 无机离子分离 * 生物离子性化合物分离 * 原理：利用不同待测离子对固定相的亲和能力（或离子交换能力）的差别来实现分离的。待测离子与离子交换树脂固定相上带电荷基团或游离的离子发生可逆交换反应： 离子交换色谱分离原理 * 对阳离子，滞留顺序为： Fe3+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+, Ni2+, Cd2+, Cu2+, Co2+, Zn2+, Mg2+, Cs+, Rb+, K+, NH4+, Na+, H+, Li+ 对阴离子，滞留顺序为：柠檬酸根, SO42-, C2O42-, I-, HSO4-, NO3-, CrO42-, Br-, SCN-, Cl-, HCOO-, CH3COO-, OH-, F- * 离子交换色谱固定相 阴、阳离子交换剂，在有机高聚物或硅胶上接枝有机季胺或磺酸基团。 ? ? Styrene-divinylbenzene resin Anionexchanger Cationexchanger * 按离子交换剂类型分四种 * 离子交换色谱流动相为盐类缓冲溶液(有一定pH和离子强度) 。 pH值：影响酸或碱的离解平衡，控制组分离子形式所占的分数。当组分以分子形式存在时，则不被保留；离子分数越高，保留值越大。 离子强度I：对保留值的影响比pH更大。组分保留值受流动相中盐类总浓度控制。 有机溶剂：外加有机溶剂通常减小组分的保留值。其极性越小，保留值越小。常用的有机溶剂有甲醇、乙醇、乙腈和二氧杂环已烷等。 离子交换色谱流动相 * 3.3.4、离子色谱法 (Ion Chromatography,简称IC) 离子色谱(IC)是70年代发展的新方法。以无机、特别是无机阴离子混合物为主要分析对象,其分离原理与离子交换色谱原理一样，只是流出的各种离子用电导检测器检测。但由于流动相都是强电解质，其电导率比待测离子约高2个数量级，这种强背景电导会完全掩盖待测离子信号。 为解决此问题，1975年Small 提出，在离子交换柱之后，再串结一根抑制柱。 * 抑制柱 该柱装填与分离柱电荷完全相反的离子交换树脂。通过分离柱后的样品再经过抑制柱，使具有高背景电导的流动相转变为低背景电导的流动相，从而可用电导检测器检测各种离子的含量。 例如：分析阳离子时，以无机酸为流动相，抑制柱为高容量的强碱性阴离子交换树脂，则发生下列反应： R+—OH + HCl(流动相)——R+—Cl- + H2O R+—OH + MCl(待测物) ——R+—Cl + M+OH- 可见，不仅大量酸转化为低电导的水，而且待测离子转化为具有更大淌度的碱。 该法的不足之处在于：抑制柱要定期再生、谱峰在经过抑制柱后会展宽，降低分离度。因此有人提出了使用电导率很低的溶液(如苯甲酸盐稀溶液)作流动相。 * 离子色谱连续抑制装置图 * 离子色谱仪 在离子色谱的基本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导检测器。 离子色谱用的泵是PEEK材料衬里的不锈钢泵。 * 在反相色谱流动相内加入“离子对”试剂 与样品中可电离的组份形成“对离子” 在反相色谱柱上分离离子型化合物 3.3.5、离子对色谱 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； * 形成离子对保留机理 * 抗组胺及减充血剂药物的分析 离子对色谱的应用 使用七烷基磺酸盐作离子对试剂 1. Maleic Acid 2. Phenylephrine 3. Phenylpropanolamine 4. Naphazoline 5. Phenacetin 6. Pyrilamine * 3.3.6 体积排阻色谱 凝胶渗透（GPC）、凝胶过滤（GFC） 分离基于分子在溶液中的体积大小 洗脱次序：大分子先被洗脱 流动相不参与分离，只起溶剂作用 分离效率低 色谱行为容易预测 * 凝胶色谱的分离机理 * 凝胶色谱的固定相 软性凝胶 半硬质凝胶 硬质凝胶 无机凝胶： 多孔硅胶和多孔玻璃 机械强度高、稳定性好 有机凝胶： 苯乙烯与二乙烯苯的共聚物 * 凝胶色谱的应用 测定高聚物分子量分布 * 生物大分子的分离测定 * 3.3.7、亲和色谱 亲和色谱——又称“特异配基色谱”。 分离机理：基