基因工程第4章工具酶.pptVIP

Chapter Four  Manipulative Enzymes 核酸酶：指通过切割相邻的两个核苷酸之间的3－5磷酸二酯键，而引发核酸分子发生水解断裂的酶。按水解断裂核酸分子的方式不同，分为核酸内切酶和外切酶。 核酸外切酶：从核酸分子的末端开始，一个核苷酸，一个核苷酸地消化降解多核苷酸的酶。 核酸内切酶：从核酸分子的内部，切割磷酸二酯键使之断裂并形成小分子片断的酶。 限制性内切酶是核酸内切酶的一种。 一、限制性内切酶的发现与种类： 1、限制性内切酶的发现： 20世纪60年代在研究细菌的限制和修饰现象时被Linn和Arber发现，他们研究的是大肠杆菌。大肠杆菌细胞可以降解噬菌体的DNA入侵，也就是在生物体可识别外源DNA，并将其降解，而保护自身的DNA不被感染。 这就是在生物体内普遍存在的限制修饰现象。限制是restriction,修饰modification,所以书上把这一系统叫做：R/M体系。 限制与修饰是由两种酶引起的，一种是甲基转移酶，一种是核酸内切酶。 核酸有四个碱基，碱基排列有44个排列顺序，内切酶具有识别位点，他的限制性体现在可以识别这些位点，并进行切割，这样外源的DNA即使进入生物细胞，也可以被降解，这就是限制;修饰是由甲基化酶来完成的。在生物内部有甲基化酶，他们可以催化甲基从给体分子S－酰苷甲硫氨酸转移给可识别的序列（内切酶），使之甲基化，这样内切酶无法