氨基酸的分离鉴定—纸层析法.pptVIP

没有规矩，不成方圆 不缺课，不迟到早退 不能把吃的东西带到实验室 实验前穿上白大褂，扎好头发，书包放到指定地点 做实验要严肃认真，严谨有序，不能打闹嬉戏、或者坐到桌上 实验过程中要接触很多的试剂及仪器，一定要注意安全 实验过程要学会统筹安排，做得既快又好 有问题及时提出 实验做完后把所用器皿清洗干净，桌面恢复原样。 值日生职责：桌面，地面，水电门窗 撰写实验报告 1 实验目的 2 原理 3 试剂、材料和仪器 4 实验步骤 5 结果与讨论 生化实验是一门专业基础课 它涵盖了基本而又经典的4大生化实验技术 层析技术 电泳技术 分光光度技术 离心技术等 这些基本的生化技术应用非常广泛 实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 一 【实验目的】 1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层析的原理和操作技术； 2、掌握分配层析法。 二【层析原理】 层析技术是目前广泛应用的一种分离技术，也就是将待分离样品经过层析系统进行分离。 层析系统：固定相，流动相，待分离样品 当流动相通过固定相时，由于样品中各组分物理化学的性质存在差异 （比如分配系数、分子极性、分子的形状和大小、带电量，吸附力、分子亲和力等）， 各组分以不同的速度移动，从而达到分离。 1、按固定相的使用形式分类：（1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析等 2、按流动相的状态分类：（1）液相层析（2）气相层析； 3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类： （1）分配层析（2）离子交换层析（3）吸附层析 （4）凝胶层析（5）亲和层析等。 三 【实验仪器、材料和试剂 】 1 仪器：烘箱 2 材料：毛细管、电热吹风机、层析缸、层析滤纸、喷雾器、 铅笔、直尺等。 3 试剂： （1）氨基酸标准液：亮氨酸、脯氨酸、赖氨酸，混合氨基酸 （2）溶剂系统：正丁醇：水：冰乙酸=4：2：1（体积比） （3）0.5%的水合茚三酮溶液。 4【实验步骤】 准备滤纸 距离底端2cm处划一直线， 各点间隔2cm, 标出各氨基酸点样位置， 边上空出，以防边缘效应 2.点样 ： 注意： 点样用的毛细管和试剂瓶上的氨基酸是一一对应的， 千万不能混淆，以免污染 3.层析 ：点样端朝下，点样处不能没 入层析液中，滤纸不能贴壁 流动相 固定相 纸层析原理： 流动相， 固定相， 样品 溶解度 分配系数 移动速率 （Rf值） 极性与Rf值的关系 层析归类 极性 分配系数：一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解达到平衡时在两种溶剂中所具有的浓度之比。 固定相：水 流动相：有机溶剂 原点至层析点距离 原点至溶剂前沿的距离 Rf值= 4.显色 切记，在层析结束后马上标出溶剂 前沿，然后放烘箱烘干后均匀喷上 显色剂，85℃烘箱10min. 5.测量、计算：分别测量X、Y值，计算各氨基 酸的Rf值,鉴定混合氨基酸中的氨基酸种类。 Lys Pro Leu 混合 溶剂前沿 原点