科研基础知识十二讲第二讲 亚细胞组分的分离与鉴定.ppt

ChIP反应对照如何设置？ Input对照 Input对照不仅可以验证染色质断裂的效果，还可以根据Input中的靶序列的含量以及染色质沉淀中的靶序列的含量，按照取样比例换算出ChIP的效率； 阳性抗体对照 组蛋白抗体、RNA Polymerase II抗体；该对照的设置有助于对实验质量进行评估 阴性抗体对照 非相关的同源抗体、目的蛋白抗体宿主的IgG或血清；该对照设置可以排除因操作原因导致的假阳性； 空白对照 不加抗体，其目的也是为了排除因操作原因导致的假阳性； 阴性引物对照 目的蛋白肯定不会结合的DNA序列，作为该抗体的阴性对照。最佳的阴性对照引物是远离在靶序列的一段与目的蛋白肯定不能结合的序列； 抗体的选择 多克隆抗体 单克隆抗体 单克隆抗体群（由一个免疫原产生的多个单克隆抗体混合物） 抗体抗原作用信号强度 极佳 由抗体的亲和力决定（极佳或者极弱） 极佳 特异性 通常很好，但有时会有非特异性相互作用 极佳，但有时会有交叉反应 极佳（由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群） 优点 亲和力高（由于抗体可以与目的蛋白的多个抗原决定蔟相互作用） 特异性好，且可以无限量供应 特异性好，亲和力高（由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群） 缺点 非特异性相互作用很难去除 需要