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BD多色流式全面项目解决方案_20150114中科院.ppt

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    BD多色流式全面解决方案 BD生物科学 Judy Identification of immune cell subsets by eight‑color antibody staining Nat Rev Immunol,2012 Nat Rev Immunol, 2012 Eight‑color antibody panels proposed by the Human Immunophenotyping Consortium 多色方案中荧光素选择的重要性 荧光素同抗原的搭配 优化仪器配置，提高分辨率 多色Panel设计实例分析 主要内容 流式多色方案中荧光素选择的重要性 V450 BV510 BV421 BV605 CD4 CD3 合适的荧光素选择帮助我们更好的理解实验 对于弱的抗原，亮的染料尤为重要 荧光素的选择是关键 荧光素的选择是关键 CD3 BV421 V450 FITC PerCP-Cy5.5 PE PE-CF594 Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 700 CD197 (CCR7) 选择正确的荧光素组合是回答生物学问题的关键 荧光素分辨率等级 等级由细胞经不同克隆，不同规格的抗体在多种流式细胞仪上的实验所得的染色指数（分辨率）的比较决定 激光器的能量，PMT电压，光学部件，抗体克隆和生物样品等多种因素均会影响荧光素/试剂在某个特定仪器上的效果 基于仪器配置选择荧光素   BD Accuri™ C6 BD FACSVerse™ BD FACSCanto™ II BD FACSVerse™ BD FACSCanto™ II BD LSR™ Fortessa BD LSR Fortessa X-20 BD LSR™ Fortessa BD LSR Fortessa X-20 488 nm FITC PE PerCP-Cy5.5 FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7 FITC PE PerCP-Cy5.5 PE-Cy7 FITC （ BB515） PE PE-CF594 PerCP-Cy5.5 PE-Cy7 FITC （BB515） PerCP-Cy5.5 640 nm APC APC APC-Cy7 APC APC-Cy7 APC Alexa Fluor 700 APC-H7/APC-Cy7 APC Alexa Fluor 700 APC-H7/APC-Cy7 405 nm     BV421/V450 BV510/V500 BV421/V450 BV510/V500 BV605 BV650 BV711 BV786 BV421/V450 BV510/V500 BV605 BV650 BV711 BV786 561 nm         PE PE-CF594 PE-Cy5 PE-Cy7 355 nm       BUV395 BUV737 BUV395 BUV737 # Lasers 2 2 3 4 5 BD Horizon Brilliant™ Violet 六种被紫激光激发的染料 基础多聚体: BV421 and BV510 串联体: BV605, BV650, BV711 and BV786 亮的染料 减少交叉激光激发 减少样品制备影响 与其他染料的比较 BV421 BV711 BV650 PE BV CD4 试剂与PE比较 Buffer Compatibility – Surface Stain Buffer compatibility : intracellular staining Unstimulated CMV pp65 CD4 CD8 IFN-g PE IFN-g PE SEB 紫激光配置 检测光学部件需匹配所用的荧光素 许多仪器已经配置可以使用纳米晶体染料 为最大限度地发挥BD Horizon Brilliant Violet 的组合优势，仪器可能需要更新配置 更新配置可提高扩展仪器的性能 BD Horizon Brilliant Ultraviolet (BUV) 两种被355nm紫外激光激发的新荧光素 BUV395: 对其他检测其几乎无溢漏 BUV737: 对Alexa Fluor 700中等溢漏 BUV395 中等亮度 Exmax/Emmax: 348 nm/395 nm 滤光片: 379/28BP BUV737 明亮 E

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