凝集反应试验.pptVIP

原理：金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白（staphylocooccal protein A,SPA）能与人及多种哺乳动物（猪、兔、羊、鼠等）血清中IgG类抗体的Fc段结合。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应 应用：可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测 特点：特异性及敏感性均较高，是目前用于快速诊断,微生物定群或分型的一种新近发展起来的敏感而简便的方法 IgG的Fc段与SpA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球体表面，仍保持其抗体活性和特异性。当其与特异性抗原相遇时，会出现特异凝集现象。在本凝集反应中，金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体，称为协同凝集反应。 红细胞凝集指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。 （1）由病毒而引起的凝集： 各种病毒能引起红细胞凝集反应 原因：红细胞表面存在着对各种病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。可以进行病毒的定性和定量分析 另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。 （2）由抗体引起的凝集： 如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞也将凝集。可用于测定抗红细胞抗体的效价或鉴定人的血型。 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的。 病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。 通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 亦称抗球蛋白试验。在血球凝集反应中，在只有抗体不产生凝集或凝集不强时，抗免疫球蛋白抗体加进去可使抗体互相结合产生凝集以进行观察的抗体检查方法。 通常的凝集反应，以红细胞抗原—抗体—红细胞抗原的形式连结起来产生凝集。库姆斯氏试验是以红细胞抗原—抗体—抗球蛋白抗体—抗体—红细胞抗原的形式连结起来而凝集的。 主要用于诊断小儿先天性溶血性贫血和免疫性溶血性疾病。即用抗IgG抗体直接与患者已结合抗体的红细胞反应(直接试验)，或用Rh阳性红细胞与患者血清反应(间接试验)，可出现凝集现象。 免疫介导的溶血性贫血病人的血样 病人的红细胞与抗人类抗体相作用 红细胞凝集：抗抗体通过连接在红细胞表面的人类抗体在红细胞之间形成连接 受检者的血清被获得（包括抗体Ig’s） 捐献者的血样被加到试管里 受检者的抗体结合到捐献者红细胞表面形成抗原抗体复合物 抗人类抗体（coombs antibody ）被加到反应溶液中 红细胞凝集发生 应用协同凝集反应 --猪链球菌血清型2型鉴定 掌握凝集反应的原理与类型 掌握玻片凝集法操作与结果判断 熟悉猪链球菌血清型鉴定的原理与操作 试剂：抗猪链球菌2型血清 材料：细菌，玻片，移液器，牙签等 一、血清预先放56℃水浴加热30min，进行灭活处理 二、SPA血清的制备 取5 ml SPA菌，用PBS洗涤3 000 r/min离心10min，洗涤2次。最后用2.5ml磷酸盐缓冲盐水制成菌悬液。 三、 SPA菌诊断液的制备即将上述稳定液与已知的抗血清结合 取SPA菌稳定液0.3ml，加猪链球菌血清0.03ml， SPA菌和血清充分摇匀，放37℃水浴中作用30min。 四、检测细菌的处理 取0.3ml灭活细菌用PBS洗涤，3 000 r/min离心10min，洗涤2次。最后用0.3ml磷酸盐缓冲盐水制成菌悬液，用于鉴定。 1、标记玻片：取玻片一张 2、加抗血清：滴加猪链球菌2型血清及PBS各一滴于玻片不同孔处 3、加待检细菌：在猪链球菌2型血清及PBS中滴加待检细菌各一滴 4、混匀：用牙签混均，前后左右摇动，观察有无凝集出现。 6、结果：记录受检细菌凝集情况及血清型鉴定结果 凝集试验有哪些？可用于检测的原理是什么？ 王淑杰 1900，Netley陆军医学院卫生助理教授 W. H. HORROCKS 发表的一篇“关于凝集试验作为大肠杆菌生物分类诊断手段的价值”一文：文中对来自污染高地表面的饮用水进行细菌学检查，文中也记载了当时应用这个方法的诸多困难 最早的微生物诊断手段 1950，LAVERGNE 发表的一篇关于“通过丝氨酸血清协同凝集布鲁杆菌”一文 跨度：半个世纪 特异性和敏感性有很大的提高 凝集试验：颗粒性抗原与相应抗体结合后发生凝集的血清学试验。 抗原与抗体复合物在电解质作用下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块。 特性：微量抗原与微量抗体结合后，就