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人源化抗体研究进展 摘要：单克隆抗体从问世到现在已广泛应用于临床，经历了一段曲折的发展历程。其中人源化抗体是一个重要的里程碑，并伴随着一系列重大的技术革新，如PCR 技术、抗体库技术、转基因动物等。抗体技术从最初的嵌合抗体、改型抗体逐渐发展为今天的人源化抗体。人源化抗体在治疗肿瘤、自身免疫性疾病、器官移植和病毒感染等方面已经显示出独特的优势和良好的应用前景。本文综述了人源化抗体的构建及其表达系统，在临床上的应用，存在的问题及展望。 关键词：嵌合抗体，人源化抗体，构建，临床应用 从20世纪70年代英国学者Milstein和德国学者Kohler利用细胞融合技术首次成功地制备出单克隆抗体以来[1]，单克隆抗体在医学、生物学、免疫学等诸多学科中发挥了巨大的作用。单克隆抗体可用于分析抗原的细微结构及检验抗原抗体未知的结构关系，还可用于分离、纯化特定分子抗原，甚至用于临床疾病的诊断和治疗等。然而，单克隆抗体技术在临床治疗应用中的进展却很慢，主要原因是目前单克隆抗体大多是鼠源性的，而鼠源性单克隆抗体应用于人体治疗时存在诸多问题：一是不能有效地激活人体中补体和Fc受体相关的效应系统；二是被人体免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体(human antigen mouse antibody，HAMA)；三是在人体循环系统中被很快清除掉。因此，在保持对特异性抗原表位高亲和力的基础上进行人源化改造，减少异源抗体的免疫原性，成为单克隆抗体研究的重点[2]。随着对抗体基因的研究和DNA分子重组技术的应用，通过基因改造获得特异性抗体成为可能。1989年Huse等首次构建了抗体基因库，从而使抗体的研究从细胞水平进入到分子水平，并推动了第3代抗体—基因工程抗体技术的发展。至此，抗体的产生技术经历了三个阶段：经典免疫方法产生的异源多克隆抗体；细胞工程产生的鼠源单克隆抗体及基因工程产生的人源单克隆抗体。 1 人源化抗体的构建 人源化抗体就是指抗体的可变区部分（即Vh和Vl区）或抗体全部由人类抗体基因所编码。人源化抗体可以大大减少异源抗体对人类机体造成的免疫副反应。人源化抗体的形式也从最初的嵌合抗体、改型抗体等逐步发展为今天的人抗体。 1.1 嵌合抗体 抗体分子与大抗原结合特异性由L链和H链V区决定，抗体C区可作为异源蛋白诱发免疫反应，产生抗小鼠抗体（human anti-mouse antibody，HAMA）。将小鼠单克隆抗体C区用人抗体C区代替而拼接成嵌合抗体(chimeric antibody)，这样表达的抗体分子中轻重链的V区是异源的，而C区是人源的，这样整个抗体分子的近2/3部分都是人源的。这样产生的抗体，减少了异源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。 嵌合抗体(chimeric antibody) 属第一代人源化抗体，有60%～70%的人源区域，是目前研究较多也较为成熟的基因工程抗体，人—鼠嵌合抗体基因工程改造策略主要包括：（1）从鼠杂交瘤中克隆V区基因。（2）选择合适的人C区基因。（3）构建载体并在一定表达系统中表达根据嵌合抗体H链和L链基因是否克隆、表达与同一载体与否，可将基因工程嵌合抗体的表达分为共转染表达模式(co-transfection model)和单载体转染表达模式(single vector transfection model)。根据所需达到的功能，人重链的恒定区可为IgA、IgD、IgE、IgG 或IgM中的一种。通常，人源抗体包括嵌合抗体常采用IgG，因其对不同的亚基都合适。1986 年，Jones[3]等用寡核苷酸构建出小鼠抗半抗原——4-羟基-3-硝基苯乙酰基己酸(NP)的免疫球蛋白VH 基因，其中编码VH 互补决定区(CDR)的序列来自小鼠的单抗，编码构架区(FR) 的序列来自与鼠抗NP 单抗的FR 同源程度较高的人骨髓瘤蛋白，通过人抗NP 重链可变区基因(hVHNP) 与含有人重链恒定区序列的表达载体连接，并转染到只分泌抗NP轻链的小鼠杂交瘤细胞J558L中， 结果获得可特异结合NP的人源化嵌合抗体。康向东等[4]从分泌抗人甲状腺球蛋白的杂交瘤细胞株hTg-60中提取总RNA，逆转录-酶链聚合反应(RT-PCR)扩增出鼠源性单克隆抗体hTg -60的VH及VL基因，经基因测序分析，设计出人源化抗体的基因引物，获得抗Tg单克隆抗体人源化VH及VL基因并将其克隆入真核表达载体，转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)，表达人源化嵌合抗hTg抗体。成功获得了6株能稳定分泌抗hTg人源化嵌合抗体的细胞株。 1.2 CDR 移植抗体 尽管嵌合抗体Fc段换成了人源化，但V区保留的鼠源性保守序列仍能诱发HAMA，因此嵌合抗体不能彻底地消除鼠免疫原性，还需进一步对鼠源抗体的V区进行改造。抗体V区由CDR和骨架区（FR）组成。