凝固酶试验标准操作规程.doc

凝固酶试验标准操作规程 1．目的 规范凝固酶试验标准操作规程。 2．原理 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片测出。另一种是菌体生成后释放于培养基中的游离凝固酶，能使凝固酶原变成凝血酶类物质，从而使血浆凝固。 3．试剂 新鲜人或兔血浆，生理盐水。 4．质控 金黄色葡萄球菌ATCC25923阳性，表皮葡萄球菌ATCC57625阴性。 5.操作步骤 5.1 玻片法 取兔或混合人血浆和盐水各一滴分别置清洁载玻片上，挑取待检菌菌落分别与血浆及盐水混合。如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。 5.2 试管法 取试管2支，分别加入0.5ml的血浆（经生理盐水1：4稀释），挑取菌落数个加入测定管中充分研磨混匀，用已知阳性菌株加入对照管，37℃水浴3～4小时。血浆凝固为阳性。 6.结果判断 玻片法：如血浆中有明显的颗粒出现而盐水中无自凝现象为阳性。试管法：血浆凝固为阳性。 7.注意事项 若被检细菌为陈旧的肉汤培养物（18～24小时）或生长不良、凝固酶活性低的菌株往往出现假阴性。 8.临床意义 金黄色葡萄球菌凝固酶试验为阳性，而表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌凝固酶试验为阴性，故此试验对鉴别葡萄球菌有重要价值。