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苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程
1.目的
规范苯丙氨酸脱氨酶试验标准操作规程。
2.原理
某些细菌能产生苯丙氨酸脱氨酶,使苯丙氨酸脱去氨基生成苯丙酮酸,与三氯化铁作用形成绿色化合物。。
3.试剂
3.1 苯丙氨酸琼脂成分
DL-苯丙氨酸 2g 氯化钠 5g
酵母浸膏 3g 磷酸氢二钠 1g
琼脂 12g 蒸馏水 1000ml
PH 7.3
3.2 制备 除琼脂外其他的成分加热溶解,调PH至7.3,再加入琼脂溶解后分装,每管约4ml,置120℃灭菌15分钟,置成斜面,凝固后冰箱保存,备用。
4.质控
大肠埃希菌ACTT 25922为黄色,阴性;普通变形杆菌CMCC49001为绿色,阳性。
5.操作步骤
将待检菌接种至苯丙氨酸琼脂斜面,35℃孵育18~24小时,在生长的菌苔上滴加三氯化铁试剂,即刻观察结果。
6.结果判断
斜面呈绿色者为阳性。
7.注意事项
7.1 注意接种菌量要多,否则出现假阴性反应。
7.2 苯丙氨酸脱氨酶试验需在加入三氯化铁试剂后,立即观察,因为绿色易很快褪去,不管阳性或阴性结果,都必须在5分钟内作出判断。
8.临床意义
本试验特异性较高,主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌、普罗威登斯菌和摩根摩根菌均为阳性,肠杆菌科其他细菌则为阴性。
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