受体配体结合研究.pptVIP

课程网址 构型(configuration)和构象(conformation) Configuration：The geometrical arrangement in polymers arising from the order of atoms determined by chemical bonds. Conformation：The geometrical arrangement in polymers arising from rotation about adjacent carbon-carbon single bonds. 构型的改变，分子中一定会有共价键的断裂和新的共价键的生成；而构象的改变不需要共价键的变换 构型异构体还是构象异构体？ 构型异构体还是构象异构体？ Techniques in receptor research 尹长城 北京大学医学部生物物理学系 3. 受体与配基结合的动力学 3.1 受体放射配基结合分析 60年代初在受体研究中采用放射性标记核素 并建立了受体放射配基结合分析 (radioligand binding assay, RBA)，它的理论基础是占领学说 该理论认为 受体与配基以单分子相互结合(分子比为1:1) 反应服从质量作用定律, 反应是可逆的 配基在结合和解离后不被代谢，也不与其它类型受体结合 受体与配基结合后产生的生物效应的强度与受体被占领的量成正比 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 受体与配基结合作用的反应式如下: 根据质量作用定律，结合反应速率为 v1= k1[R][L], 解离反应速率为 v2= k2[RL] 当反应达到平衡时, v1= v2，所以 （1） [R]、[L]、[RL]分别为游离受体、游离配基、受体-配基复合物的摩尔浓度 k1、k2分别是结合速率常数、解离速率常数 Kd是解离平衡常数，单位为mol/L; Kd值的大小作为衡量配基与受体相互结合能力的一个重要物理量: Kd值愈小结合能力愈大; Kd又称为亲和常数 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 设：[RT]为受体的初始浓度 （2） 重排并整理得： （3） 上式即Scatchard方程 ，以[RL]/[L]为纵轴，以[RL]为横轴作图得一直线 直线斜率为-1/Kd, 横轴截距为[RT], 纵轴截距为[RT]/Kd Scatchard图 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 同理可推出： （4） 上式为Woolf方程：以[L]/[RL]为纵轴，以[L]为横轴作图得一直线 直线的斜率为1/[RT], 横轴截距为-1/Kd, 纵轴截距为Kd/[RT] Woolf图 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 同理还可推出： （5） 上式为Lineweaver-Burk方程，亦称双倒数方程：以1/[RL]为纵轴，以1/[L]为横轴作图得一直线 直线的斜率为Kd/[RT], 横轴截距为–1/Kd, 纵轴截距为1/[RT] Lineweaver-Burk图 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 设：[LT]是总配基浓度, [L] = [LT] – [RL], 将 [L] = [LT] – [RL] 和 [R] = [RT] – [RL]代入(2)式，经整理得： （6） 上式为以[RL]为变量的双曲线一元二次方程 当[RT]、Kd固定时，[RL]随[LT]的变化而变化，开始上升很快，以后逐渐趋向水平，这就是饱和曲线 受体与配基结合曲线 SB为特异性结合，NSB为非特异性结合，TB为总结合 [SB]= [TB] – [NSB] 3.1 单位点受体与配基结合反应的数学表达 将(1)式重排变成下式： （7） 设[RL] = ?[RT