大肠菌群检查.doc

大肠菌群检查 1 简述 大肠菌群（Coliform）是指37℃生长时能发酵乳糖，在24小时内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌。符合上述定义的细菌除大肠埃希菌属（Escherichia）外，该包括肠杆菌科的肠杆菌属（Enterobacter）、枸橼酸菌属（Citrobacter）、克雷伯菌属（Klebsiella）等菌属的菌种。大肠菌群包括了正常人畜肠道内的全部需氧的革兰阴性杆菌。以大肠菌群作为卫生指示菌比大肠埃希菌具有广泛的卫生学意义。因此，国际上以大肠菌群作为药品、食品、饮水等的卫生指示菌，对卫生质量的要求更严格。 大肠菌群的检查通过增菌、分离、革兰染色、镜检和确正试验等步骤。 2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌）。 3 试液、指示液（大肠埃希菌）。 4 培养基 4.1 胆盐乳糖发酵培养基[附录5.32]。 4.2 乳糖培养基[附录5.33]。 4.3 曙红亚甲蓝（EMB）琼脂[附录5.8]。 4.4 麦康凯琼脂[附录5.9]。 5 对照用菌液（大肠埃希菌，同控制菌方法验证5.2）。 6 操作步骤 6.1 操作程序 36℃±1℃ 供试品→供试液→胆盐乳糖发酵培养基 产酸产气→EMB或 18～24h 36℃±1℃ 36℃±1℃ MaCL平板 乳糖发酵培养基 产酸产气→报告 18～24h 18～24h 6.2 增菌培养 取不少于10ml胆盐乳糖发酵培养基管3支，加入1:10供试液1ml（含供试品0.1g或0.1ml）；1:100稀释的供试液1ml（含供试品0.01g或0.01ml）和1:1000稀释的供试液1ml（含供试品0.001g或0.001ml）。取1支胆盐乳糖发酵培养基10ml管，加入稀释剂1ml作为阴性对照。均培养18～24小时，观察结果。 加供试液的胆盐乳糖发酵管若无菌生长、或有菌生长但不产酸产气，则判该管未检出大肠菌群。若胆盐乳糖发酵管产酸产气，应进一步分离培养。 6.3 分离培养 将上述产酸产气的发酵管中的培养物，分别划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。 大肠菌群的菌落在曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上呈紫黑、紫红、红或粉红色，圆形，扁平或凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润；在麦康凯琼脂培养基的平板上呈鲜桃红色或粉红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。若平板上无菌落生长，或生长的菌落与上述菌落特征不符或为非革兰性无芽孢杆菌，判该管未检出大肠菌群；若平板上生长有上述菌落形态特征或疑似菌落，且为革兰阴性无芽孢杆菌，应进行确证试验。 6.4 确证试验 从上述分离平板上挑选4～5个疑似菌落，接种于乳糖发酵管中，培养24～48小时。若产酸产气，判该胆盐乳糖发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。 6.5 结果判断 根据大肠菌群的检出管数，按表2报告1g或1ml供试品中的大肠菌群数。 表2 大肠菌群MPN（Most probable number）表 各供试品量的检出结果 最可能的大肠菌群数N（个/g或ml） 103 102N103 10N102 10 0.1 g或0.1ml 0.01g或0.01ml 0.001g或0.001ml ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － － － － 注：＋检出大肠菌群。－未检出大肠菌群 7 注意事项 7.1 加供试液的胆盐乳糖发酵管，由于有的药渣颜色较深或沉淀物较多，干扰结果的观察。应仔细观察倒管底部或试管壁、培养液表面有无气泡。针尖大的气泡也是产气。 7.2 胆盐乳糖发酵培养基内的倒管不小于30mm×3mm（内径）。否则，倒管被药渣遮挡，不便观察结果。 7.3 加供试液的胆盐乳糖发酵管，经培养后，其倒管内无论产气多少，均应做分离培养，各蓝染色、镜检。如产气太少，可延长培养时间。 7.4 尽可能多挑选曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基平板上大肠菌群的可疑菌落，做乳糖打搅确证试验。挑可疑菌落越多，可提高大肠菌群检出率。