高效液相色谱法标准操作规程.doc

高效液相色谱法标准操作规程 1 编制依据：《中华人民共和国药典》2005年版（二部） 2 检验操作方法 2.1 仪器及用具 电子天平 2.2 操作方法 2.2.1 流动相的制备 按各品种项下的要求按比例配制 2.2.2 供试品溶液制备：用电子天平精密称取供试品，溶解，定 容，超声处理。 2.2.3 系统适用性试验 按各品种项下的要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进试验和调整，应能达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。 2.2.3.1 色谱柱的理论板数（n）在选取在规定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试吕主成分或内标物质峰的保留时间tR(以分钟记或长度记，下同，但应取相同单位)和半峰高宽（Wh/2）,按 n=5.54(tR/Wh/2)2计算色谱柱的理论板数。如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等）使理论板数达到要求。 2.2.3.2 分离度 定量分析时，为了便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度（R）计算公式为： R=2(tR2－ tR1)/(W1+W2) 式中 tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为两峰的峰宽。 除加有规定外，分离度应大于1.5。 2.2.3.3 重复性 取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%.也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应不大于2.0%. 2.2.3.4 拖尾因子 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。 2.2.3.5 测定法 定量测定时，可根据供试品的具体情况采用峰面积法或峰高法。测定杂质含量时，须采用峰面积法。 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），计算含量。 Ax 含量（Cx）=CR AR Ax 为供试品（或其杂质）峰面积或峰高 Cx 供试品（或杂质）的浓度 CR 为对照品的浓度 AR 为对照品的浓度