金黄色葡萄球菌资料.doc

金黄色葡萄球菌 1 简述 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为葡萄球菌属中的一种，广泛分布于自然界，空气、土壤、水及物品上，人和动物皮肤及与外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。本菌可产生多种毒素及酶，这些毒性物质引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症和脓毒血症，是人类化脓性感染中重要的病原菌。本菌抵抗力较强，干燥情况下能生存数月，80℃30min的条件下尚能存活，5%石炭酸或0.1%升汞溶液10～15min才会被杀死。 金黄色葡萄球菌检查按增菌、分离、纯培养、革兰染色、镜检和血浆凝固酶试验等步骤进行。本法使用于外用药品及一般滴眼剂、眼膏剂的检查。 2 仪器、设备及用具（见大肠埃希菌2）。 3 试液、指示液 3.1 0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2无菌磷酸盐缓冲液[附录3.1，3.5]。 3.2 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液[附录3.2]。 3.3 革兰染色液[附录2.4，2.10，2.16]。 3.4 无菌枸橼酸纳氯化钠溶液[附录2.7]。 3.5 血浆的制备 以无菌注射器吸取灭菌的5%枸橼酸纳的0.9%的氯化钠溶液1ml，用无菌操作采取家兔（或羊、人）血9ml，轻轻混匀数分钟。待血液不凝固时，徐徐放入灭菌离心管中，及时离心（500r/min离心5min0，分离血浆，用灭菌吸管将血浆转移至灭菌试管中，置冰箱备用。临用前必须用已知血浆凝固酶试验阳性的金黄色葡萄球菌（如金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]测试，证明血浆合格后，方可用于试验。 3.6 1%酚磺酞指示液[附录4.4]。 4 培养基 4.1 营养肉汤培养基[附录5.1]。 4.2 营养琼脂培养基[附录5.2]。 4.3 亚碲酸盐肉汤培养基[附录5.15]。 4.4 卵黄氯化钠琼脂培养基[附录5.16]。 4.5 甘露醇氯化钠琼脂培养基[附录5.17]。 5 对照用菌液 取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]营养琼脂斜面新鲜培养物少许，接种至5ml营养肉汤培养基中，36℃±1℃培养18～24h，用0.9%无菌氯化钠溶液，按10倍递增稀释至1:106，加入含10～100cfu的对照菌菌液（一般用量为1:1060.1ml），同时用营养琼脂平板计数。 6 操作方法 6.1 供试品的检验量9见细菌、霉菌和酵母菌计数5.3）。 6.2 供试液的制备（见细菌、霉菌和酵母菌计数7）。 含抑菌成分供试品供试液的制备（见大肠埃希菌6.2）。 6.3 增菌培养 取营养肉汤（或亚碲酸钠肉汤）培养基2份，每份100ml，1份加入10ml供试液，另一份加入与供试液等量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液作为阴性对照，置36℃±1℃培养18～24h（必要时可延至48h）。阴性对照应无菌生长。 6.4 分离培养 将上述供试品增菌培养液，以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置36℃±1℃培养24～72h。当供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表1所列特征，可报告为1g或1ml供试品未检出金黄色葡萄球菌。 表1 金黄色葡萄球菌在三种选择性培养基上菌落形态特征 培养基 菌落形态特征 卵黄氯化钠琼脂 金黄色，圆形凸起，边缘整齐，光滑湿润，外周有分解卵磷脂后产生的乳浊圈，菌落直径1～2mm 甘露醇氯化钠琼脂 金黄色，圆形凸起，边缘整齐，光滑湿润，外周有黄色环，菌落直径0.7～1mm 6.5 纯培养 当供试品分离平板生长菌落与表1所列菌落特征相似或疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别用接种针，轻轻沾取菌落中心表面培养物，接种于营养琼脂斜面上，于36℃±1℃培养18～24h，取营养琼脂斜面培养物作革兰染色、镜检及接种营养琼脂肉汤于36℃±1℃培养18～24h做血浆凝固酶试验。 6.6 革兰染色、镜检 6.6.1 革兰染色（见大肠埃希菌7.5）。 6.6.2 镜检金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，一般不产生荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列。 6.7 血浆凝固酶试验 试管法：取无菌试管（10mm×100mm）3支，各加入血浆和0.9%无菌氯化钠溶液（1:1）0.5ml，1支加入斜面培养物菌悬液（或被检菌的营养肉汤培养液）0.5ml，其余2支作对照管：1支加入金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]菌悬液或营养肉汤培养液0.5ml作为阳性对照；另1支加入营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml作阴性对照。三管同时置36℃±1℃水浴或恒温培养箱，3h后开始检查，以后每隔适当时间观察一次，直至24h。检查时，轻轻将试管倾斜，（动作勿大）仔细观察，阴性对照管血浆流动自如，阳性对照管液呈凝固状，试验管液呈凝固者为阳性反应；不凝固为阴性反应。阳性对照管和阴性对照管任何一管不符合要求时