大鼠组胺（HI）酶联免疫检测.doc

大鼠组胺(HIS)酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测大鼠组胺(HIS))，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用 途： 用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中组胺(HIS)的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中大鼠组胺(HIS)的水平。向预先包被了大鼠组胺(HIS)单克隆抗体的酶标孔中加入组胺(HIS)，温育；温育后，加入生物素标记的抗HIS抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠组胺(HIS)的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1 标准品（240ng/ml） 0.5ml 7 显色剂A液 6ml 2 标准品稀释液 3ml 8 显色剂B液 6ml 3 酶标包被板 12孔×8条 9 终止液 6ml 4 链霉亲和素-HRP 6ml 10 说明书 1份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2张 6 生物素标记的抗- HIS抗体 1ml 12 密封袋 1个 需要而未提供的试剂和器材 37℃ 标准规格酶标仪。 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水， 一次性试管 吸水纸 注意事项 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应 操作程序 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）： 120ng/ml （5号标准品） 120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液 60ng/ml （4号标准品） 120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液 30ng/ml （3号标准品） 120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液 15ng/ml （2号标准品） 120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液 7.5ng/ml （1号标准品） 120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 加样：1）空白孔：空白对照孔不加样品，生物素标记的抗HIS抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂AB和终止液，其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50μl，链霉素-HRP50μl（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加）；3)待测样品孔:加入样本40μl，然后各加入抗- HIS抗体10μl、链酶亲和素-HRP50μl，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37℃温育60 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。 9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 加入准备好的样品和标准品，生物素标记二抗和酶标试剂，37℃反应60分钟 洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色 加入终止液 10分钟之内读OD值 计算 检测范围：0.5ng/ml→200ng/ml。 规格： 96T/盒 保存： 2-8℃ 有效期： 6个月（2-8℃