2012-1-10-林彭思远-多原核在辅助生殖中的研究进展.pptVIP

多原核受精卵染色体组成 多原核胚胎发育及遗传多态性分析 多原核胚胎的移植价值 选择性显微移除多原核受精卵中多余原核以维持其二倍性 选择性显微移除3PN受精卵中的1个原核以维持其二倍性 在常规IVF治疗中，大部分患者正常受精卵已可以满足需要，有生殖中心统计过每年有超过700例三原核受精卵的出现，其中还有一些是只有一两个卵的患者。选择性移除多余原核以维持胚胎二倍性，获得可移植的胚胎可以为这些患者带来福音。 需注意的问题 1、多余原核的识别 2、两个中心体 3、ICSI后异常原核形成 雌、雄原核的识别 观察是否有精子尾部残留物的存在 仅有约1%的原核可观察到精子残留物的存在 体积较大的为雄原核 距第二极体较近的为雌原核 多采用此种方法鉴别雌、雄原核，在双雄原核的3PN中移除距PB2较远的雄原核，在双雌原核的受精卵中移除距PB2较近的雌原核。 人类三原核胚胎的自我校正 收集ICSI-3PN胚胎32枚和IVF-3PN胚胎18枚 体外培养至第6天的胚胎通过FISH进行染色体整倍性的检测， 对发育至囊胚的胚胎通过13、18、21、X和Y五色荧光FISH进行染色体整倍性的检测， 其中二倍体囊胚及其父母再通过6、16、X染色体上STR位点扩增检测其遗传物质亲源性。 IVF-3PN胚胎在发育早期自我校正能力较差，主要是由于多为双精受精，多余原核为雄原核，胞质中存在两个中心体，引起第一次有丝分裂染色体分布紊乱，使胚胎发育停滞。 IVF-3PN中只有一枚经过自我校正形成二倍体的囊胚，未做遗传物质的亲缘关系检测，考虑该胚胎为双雌原核的3PN受精卵发育而成，此种胚胎是由于卵巢超刺激作用产生的较为少见的形式，为异常胚胎，在常规IVF中是不用于移植的。 IVF-3PN胚胎中，自我校正最早在发育至第6天的胚胎中发生，提示选择性显微移除其多余原核以维持二倍性在IVF-3PN受精卵中是有必要的。 结论 ICSI-3PN胚胎比IVF-3PN胚胎具有更强的自我校正能力，提示多原核胚胎自我校正能力更多的是由原核来源决定，而不是遗传物质的倍性。 IVF-3PN受精卵可以通过选择性显微移除其多余原核以获得可移植的胚胎，而ICSI-3PN胚胎约50%可通过前期的自我校正发育至囊胚阶段，可以对其囊胚进行检测以获得可移植的胚胎。 总结 常规IVF中3PN受精卵及2细胞胚胎多为三倍体，2细胞胚胎染色体核型紊乱。 ICSI-3PN胚胎卵裂率下降，但成囊率反而较高，说明ICSI-3PN胚胎可以通过自我校正机制而获得正常的二倍体囊胚。 IVF-3PN胚胎可以通过移除多余雄原核而获得正常二倍体囊胚，ICSI-3PN受精卵发育成的囊胚中约有一半为正常二倍体核型，可以通过STR基因座多态性的分析判别胚胎遗传物质来源以确定正常囊胚。 * * 多原核胚胎在辅助生殖技术中的研究进展 报告人：林彭思远 2012-1-10 体外生殖技术中多原核胚胎较为常见，且存在遗传物质倍性的改变，可能会导致多倍体胚胎的出现，因此临床上多原核受精卵均被遗弃，不用于移植。 IVF-3PN约占5%~8.1%，ICSI-3PN约占2.5%~6.2%。 ★ 多精受精（IVF-3PN） 卵母细胞过熟或不成熟、受精时精子浓度过高、手术取卵过程造成卵母细胞透明带损伤或先天透明带缺损 女方年龄和穿刺卵泡数与成熟卵的多原核受精卵生成率呈负相关 精液a+b级精子密度与未成熟卵多原核受精卵生成率呈正相关 第二极体未排出（ICSI-3PN） 多了一个雌原核的三原核受精卵 有报道指出ICSI后的3PN可能是由于严重少弱精患者的双倍体精子产生的。从临床立场来看 ，严重少弱精患者在ICSI后有更高获得三倍体胚胎的可能。 Egozcue S,Blanco J,Vidal F,et al. Egozcue1 Diploid sperm and the origin of triploidy.Hum Reprod,2002,17(1):5-7. 2009-重庆医科大学有学者对人类异常受精卵及胚胎染色体组成做过相关研究，共收集IVF来源3PN受精卵及胚胎323枚。含秋水仙素培养基中培养14-20h后去除透明带、低渗、梯度固定常规收获染色体。 受精卵 三倍体75.7% 2细胞胚胎 三倍体70.8% 2细胞胚胎 三倍体9.3%，近单倍体（32%），近二倍体（56%） IVF-3PN受精卵及2细胞胚胎多为三倍体，2细胞胚胎多为近二倍体、近单倍体，但染色体核型紊乱 染色体组成 2005-汉城国际大学医学生殖研究所有学者采用4,13,18,