小白鼠骨髓细胞染色体制备与观察.pptVIP

试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察 一．实验目的： 1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。 二．原理： 活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理，可得到清晰的中期染色体标本。 三．材料试剂 1．材料：小白鼠； 2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。 四．操作步骤 1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml（0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和对二氯苯。 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl低渗10min（8ml,37℃）。 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块分散，静置10min，再离心10min，弃上清液，重复一次。 4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依沉淀量定）。 5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液（取悬液前吸打均匀），单向吹气展开，酒精灯上文火烘干。 6．加Giemsa染液染色8－10min，流水冲去染液（注意水流不可急，细流冲去即可），干燥（晾干），观察，可见分散良好的染色体。 五．结果与讨论 1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？ * 小白鼠的保定和注射 小鼠骨髓细胞染色体 *