酶分子的修饰重点.pptVIP

第七节 核苷酸置换修饰 核酸类酶 将酶分子上核苷酸链上的某一个核苷酸置换成另一个核苷酸，从而改变酶的催化特征的修饰方法称为核苷酸置换修饰。 方法：定位突变技术 第六节 物理修饰 一、定义：通过各种物理方法使酶分子的空间构象发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能。 高温、高压、高盐、低温、真空、失重、极端pH、有毒环境等极端条件下。 物理修饰的特点: 不改变酶的组分和基团，酶分子中的共价键不发生改变，只是在物理方法的作用下，副键发生某些变化和重排。 如：用高压方法处理纤维素酶以后，该酶的最适温度有所降低；在室温下，高压修饰酶比天然酶的活力提高了。 变性剂改变空间构象 在某些变性剂的作用下，先使酶原有空间构象破坏，然后在不同的条件下，使酶分子重新构建新的构象。 如：先用盐酸胍等变性剂使胰蛋白酶的原有构象破坏，通过透析除去变性剂后，在不同温度下，使酶重新折叠形成新的构象。 不同温度下重新构建构象的胰蛋白酶的稳定性不同。 50 ℃条件下重新构建的新构象与20℃重建构象的酶的稳定性提高5倍。 * * * * * * * * * * * * * * * * * 抗体与抗原间特异结合是由于它们之间特定分子结构引起的。用酶分子修饰法使酶的结构产生改变，抗体、抗原就不再特异结合，可能降低或消除其抗原性。 利用水溶性大分子对酶进行修饰可降低或消除酶的抗原性。 第三节 酶蛋白侧链基团修饰 一、定义：采用一定方法使酶分子的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能。 侧链基团：组成蛋白质氨基酸残基上的功能团。主要有：氨基、羧基、胍基、巯基、酚基、咪唑基、吲哚基。 侧链基团修饰剂：采用的各种小分子化合物。 20种不同氨基酸的侧链基团中只有极性氨基酸的侧链易被修饰，它们一般具有亲核性。 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类： 1.带正电荷的极性R基氨基酸（共3种）： 赖氨酸(Lysine,Lys,K), 精氨酸(Arginine,Arg,R), 组氨酸(Histidine,His,H) 2.带负电荷的极性R基氨基酸（共2种）： 天冬氨酸(Aspartic acid,Asp,D), 谷氨酸(Glutamic acid,Glu,E) 3.无电荷的极性R基氨基酸（共7种）： 丝氨酸(Serine,Ser,S), 苏氨酸(Threonine,Thr,T), 酪氨酸(Tyrosine,Tyr,Y), 半胱氨酸(Cysteine,Cys,C), 天冬酰胺(Asparagine,Asn,N), 甘氨酸(Glycine,Gly,G), 谷氨酰胺(Glutamine,Gln,Q) 4. 非极性R基氨基酸（共8种）： 丙氨酸(Alanine,Ala,A), 亮氨酸(Leucine,Leu, L), 缬氨酸(Valine,Val,V)), 异亮氨酸(Isoleucine,Ile,I), 苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe,F), 色氨酸(Tryptophan,Trp,W), 甲硫氨酸(Methionine,Met,M), 脯氨酸(Proline,Pro,P) 这些基团可以组成各种副键，对酶的空间结构的形成和稳定起着重要作用。如果这些基团发生改变，就会引起副键的改变，使空间结构发生改变，从而引起酶的特性和功能的改变。 酶分子的侧链基团修饰，可以研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响.并可以用于研究酶的活性中心的必需基团。如果某一基团修饰后不引起酶活力的显著变化，则可以认为这个基团属于非必需基团；如果某一基团修饰后引起酶活力的显著变化，则可以认为这个基团可能是酶催化的必需基团。 一、氨基修饰 来源：Lys, Arg, His, Gln 修饰反应：酰基化与烷基化 修饰剂: 三硝基苯磺酸（TNBS）、丹磺酰氯（DNS）、 2，4－二硝基氟苯（DNFB）、碘乙酸、碘乙酰胺、 2，4，6－三硝基苯磺酸、亚硝酸等 ①乙酸酐修饰 ② 2，4，6—三硝基苯磺酸修饰 ③2，4—二硝基氟苯修饰(Sanger反应) ④氨基的烷基化。这类试剂包括卤代乙酸、芳香卤和芳香磺酸等。 ⑤丹磺酰氯(DNS)修饰。 ⑥苯异硫氰酸酯(PITC)修饰(即Edman反应) 二、羧基的化学修饰 修饰羧基的反应专一性较差。 常用水溶性碳化二亚胺修饰天冬氨酸和谷氨酸。可定量测定酶分子中羧基的数目。 + ? 水溶性碳化二亚胺