显微受精技术.pptVIP

通过显微操作，将动物精子或生精细胞直接注入卵母细胞内，使其完成受精过程 是将体外受精技术与显微操作相结合而形成的一项新技术 发展概况 20世纪60年代，模式生物 1962年, 首次将海胆精子直接注入海胆卵中，但并未激活卵子 1966年, 将青蛙精子注射到青蛙卵中，蛙卵发生了激活 20世纪70年代，哺乳动物 1976年，发现将不同种属动物精子注入金黄地鼠的卵胞浆中，都能形成原核 1988年，世界首例显微受精动物（小鼠）诞生 目前，显微受精技术已成为治疗雄性不育的重要手段 意义 操作程序 精子与卵子的准备 精子准备：小型动物（如小鼠等）一般用处死的方法获得精子，其它动物一般人工采精获得精子 卵子准备： 精子注射 受精卵的体外培养及移植 显微受精的基本方法 透明带打孔技术（zona pellucida drilling , ZPD） 透明带带下注射法（subzonal injection, SUZI） 胞质内注射法（intracytoplasmic sperm injection, ICSI） 透明带打孔（ZPD）技术 在卵细胞的透明带上人为地钻一个小孔，为精子进入卵子提供机会，或使精子容易入卵。 撕开透明带 　 总受精率有所上升，但多精受精率亦趋上升 酸溶法穿孔 受精率低，卵母细胞也容易受损伤 激光打孔 已基本淘汰，仅在生精细胞显微受精中还用到 针磨法 透明带带下注射法（SUZI） 透明带带下注射法是将一个或多个精子注入卵周隙内，精子带下注射数量是此项技术成败的关键。 胞质内注射法（ICSI） 胞质内注射法是将精子直接注入卵母细胞胞质内，完成受精过程。 影响显微受精效率的因素 注射方法（注射部位、数量等） 精子状态(获能、死活、发育阶段及完整性等） 卵母细胞状态 显微受精卵的激活 显微操作条件与技术 操作技术的影响 极其精细的操作，人员操作技能，操作工具的质量及环境条件 注射针的直径、实验材料和环境温度 注射针内径，5μm优于8μm 复习思考题 显微受精的基本方法有哪些? ICSI较IVF有哪些优势? 注射方法的影响 注射方法要依据动物的卵母细胞的耐操作能力而定。 鼠类，尤其是小鼠卵母细胞进行ICSI十分困难，1995年获首批后代。多用SUZI。受精率67.3%，54%受精卵发育成个体。 人类ICSI和SUZI技术都十分有效，一般活的精子多选择SUZI法，而死的或不完整的精子则选择ICSI法 猪ICSI和SUZI受精率、卵裂率和体外2－8细胞发育率无差异 牛ICSI法的受精率比SUZI法高，但囊胚率没有差异 精子状态的影响 精子获能、顶体反应 对于ICSI受精并不重要，但在SUZI受精时，往往采用获能精子 精子新鲜和活力 新鲜精子、冷冻精子和不活动精子同样可获得理想的受精率 精子完整性 精子头部或精子核都可受精 精子死活 精子核对低温和高温都具有很强的耐性，精子的死活对ICSI的成功与否并不重要 精子发生阶段 SUZI睾丸和附睾头精子几乎不能使卵细胞受精;ICSI睾丸和附睾精子的胞质内受精十分有效。仓鼠和人球形精细胞核ICSI能受精。人睾丸次级精母细胞胞质内受精成功，胚胎移植后妊娠 * * 显微受精技术 Microfertilizatio 教学计划 计划学时：1 学习要求 掌握 显微受精的概念 显微受精的基本方法 一般了解 IVF的发展历程、发展概况 基本概念 为研究受精生物学机制提供手段 治疗和改善人及动物的不育 提高良种公畜的利用率 保护野生动物资源和拯救珍稀动物 自从该项技术问世以来，世界上已有5000多名显微受精试管婴儿诞生。 Thank you for your attention!