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马铃薯干腐病优势病原菌Fusarium sambucinum分子检测技术的建立
魏巍赵冬梅张岱杨志辉朱杰华
河北农业大学植物保护学院
摘要：
马铃薯干腐病是马铃薯最重要的贮藏期病害z—,现已成为马铃薯贮藏期烂窖 的重要原因。实现病原菌的快速检测对病害诊断和科学防控具有重要的实践意 义。本研究基于镰刀菌翻译延仲因子序列设计了一对检测接骨木镰刀菌 Fusarium sambucinum的特异引物Fs-F/Fs-R。该特异引物可从接骨木镰刀菌中 获得309bp的特异性扩增片段，而其他种类镰刀菌及马铃薯重要病害病原菌中 均无此片段，说明该引物具有专一性。该体系的灵敏度检测结果表明，最低能检 测到的接骨木镰刀菌基因组DNA浓度为70pg/ u L。该引物也适用于发病马铃薯 块茎中接骨木镰刀菌的快速检测。
关键词：
马铃薯干腐病;镰刀菌;分子检测；接骨木镰刀菌;
作者简介：朱杰华，E-ma订:zhujichua.356@126. com
收稿日期:2016-09-03
基金：国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-10-P12)
Molecular identification of dominant pathogen Fusarium
sambucinum causing potato dry rot
Wei Wei Zhao Dongmei Zhang Dai Yang Zhihui Zhu
Tiehua
College ofPlantProt ection, Agricultural
University of Hebei;
Abstract：
Potato dry rot, caused by various Fusariumspp., is one of the most important storage diseases of potato. This disease became a main reason of rotten potatoes in the storage cavern. Rapid detection of the pathogen has the important practical significanee for disease diagnosis and scicntific prevention emd control- In this study, based on the translation elongation factor-1 alpha (TEFT a) sequences of Fusarium, a specific pair of primers FsF/Fs-R for F. sambucinum was designed.Using Fs-F/Fs-R, PCR product with the length of 309 bp was amplified only fromF. sambucinum, but not other Fusariumspp. and pathogens causing potato important diseases. The detection sensitivity for genomic DNA was 70 pg/ M L. This method can be used to detect F. sambucinumin potato tubers.
Keyword：
potato dry rot; Fusariuin; molecular detection; Fusaritmi sambucintmi;
Received： 2016-09-03
由多种镰刀菌引起的马铃薯干腐病是马铃薯贮藏期重要病害乞一，其常年发病 率为10%~30%口1，最高可达60%以上RL现已成为马铃薯产业进一步发展的瓶 颈。因此，寻找快速、准确的干腐病菌的分子检测技术对干腐病的诊断和科学防 治具有重要意义。形态学鉴定是传统的镰刀菌鉴定方法，然而，由于镰刀菌的分 类系统繁多复杂，并口温湿度、光照、pH等环境条件的改变都会导致其培养性 状发生明显变化RL加Z形态鉴定本身比较耗时耗力，因此，镰刀菌的鉴定面 临着巨大挑战。近年来，随着分子生物学的发展，特别是GenBank核酸序列数据 库中真菌序列的不断丰富为镰刀菌的准确、快速鉴定开辟了新的方向。
国内外关于马铃薯干腐病菌的分子检测研究较少。2006年，Atallah等血应用 实时荧光定量PCR对引起马铃薯块茎腐烂的5种病原菌进行了检测和定量，文中 利用B-微管蛋白(P-tubulin)基因设计了一对检测接骨木镰刀菌
F. sambucinum的引物，该引物可以成功检测到该菌，但也可扩增出燕麦镰刀菌 F
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