酵母核糖核酸RNA提取.pptVIP

五、计算 1． （式中：4为反应液量4ml） 2．反应速度的计算：以反应消耗的H2O2 mmol数表示。 反应速度=加入的H2O2 mmol数－剩余的H2O2 mmol数 剩余的H2O2 mmol数：KMnO4 0.005 mol/L×消耗的KMnO4毫升数× 5/2 （式中：5/2为KMnO4与H2O2反应中mol换算系数） 3．求Km值：实验测得的结果，以1/v对1/[S]作图，求出V和Km的数值。 0.004 实验七 维生素C的定量测定 2.6- DCPIP（2.6-二氯酚靛酚）滴定法 一、实验目的 1. 学习并掌握定量测量维生素C的原理和方法。 2. 熟练微量滴定法的基本操作。 二、实验原理 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有 （1）2，6-DCPIP (Dichlorophenolindo phenol ) （还原型VC） （2）2，4-二硝基苯肼法 （总VC） （3）碘酸法 （4）碘量法 （5）荧光分光光度法 三、试剂及仪器 （一）试剂及材料 （1）松针 （2）酸化蒸馏水 （3）2，6–DCPIP；将50mg　2，6–DCPIP溶解于约200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中。冷后稀释至250ml。装入棕色瓶内。放在 冰箱里保存。2，6–DCPIP不稳定, 每周必须重新配制，使用前需按照下法标定： 取5ml标准抗坏血酸溶液加5ml　1％草酸，以2，6–DCPIP滴定呈粉红色，并在15秒钟内不退色为终点。计算2，6–DCPIP溶液的浓度。 （4）标准抗坏血酸溶液：溶解100mg纯抗坏血酸粉状结晶于1％草酸中，然后稀释到500ml。 使用前临时配制。 （二）器材 （1）锥形瓶（50ml）（2）小研钵（3）吸量管（10ml）（4）漏斗（5）滤纸（6）容量瓶（50ml）（7）微量滴定管（5ml） 四、操作步骤 1.准确称取松针约1g。样品必须用温水洗去泥土，并在空气中风干。放入研钵中，加1g石英砂，再加酸化蒸馏水5～10ml一起研磨。 2. 离心（3500转/分）10分钟，将上清液移入容量瓶，用酸化蒸馏水定容至50ml。 3.取10ml上述溶液放入小锥形瓶内，用微量滴定管，以2，6–DCPIP（蓝色）滴定至提取液呈现淡粉红色，并保持15～30秒不褪。(滴定过程必须迅速，不要超过2min。因为在本滴定条件下，一些非维生素C还原物质的还原作用较迟缓，快速滴定右以避免或减少它们的影响) 4.另取10ml酸化蒸馏水作空白对照滴定。 提取液和空白对照各做三份，对结果取平均值进行计算 五、计算 式中：VA为滴定样品提取液所耗用的2，6–DCPIP的平均毫升数；VB为滴定空白对照所耗用的2，6–DCPIP的平均毫升数；C为样品提取液的总毫升数；D为滴定时所取的样品提取液毫升数；W为被检样品的质量。T为1ml标准0.001N 2，6–DCPIP溶液相当维生素C的毫克数，T的具体数目为0.088mg/ml。 思考题 为了准确测得维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？ 实验八 血糖的定量测定（GOD-PAP法） 一、实验目的 学习GOD-PAP法测定血糖含量的原理和方法。 二、实验原理 动物血液中的糖主要是葡萄糖，正常情况下，其含量较恒定。健康动物血糖水平为80-120mg/100ml。GOD-PAP法，即过氧化物酶-抗过氧化物酶法是近几年临床血糖定量测定的普遍方法。该法测定血糖依据的酶反应为： 葡萄糖+O2+H2O = 葡萄糖酸+H2O2 2H2O2+4-氨基安替比林+酚 = 醌亚胺+4H2O 醌亚胺在A480nm-A550nm波长有最大吸收，所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。在同样条件下，测定葡萄糖标准液和样品的吸收值，代入后面所给公式即可求出样品中葡萄糖的含量。 三、试剂及仪器 1.血糖试剂盒 酶试剂（GOD，PAP，磷酸盐，酚，4-氨基安替比林） 100mg/dL血糖标准溶液 2.兔血清 四、操作步骤 取3只试管，按下列加入试剂 空白 标准 样品 酶制剂 3.00ml 3.00ml 3.00ml 蒸馏水 0.02ml ----- ----- 葡萄糖标准溶液 ----- 0.02ml ----- 样品 ----- ----- 0.02ml 分别将各管溶液摇匀，37度保温15分钟，505nm波长比色。 五、计算 C样品= (A样品/A标准) x C标准 实验九?? 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 一