支气管肺泡灌洗液相关实验室操作课件.pptVIP

支气管肺泡灌洗液相关实验室操作 目 录 CONTENTS 1 2 3 BALF标本保存运送 形态学检查 病原学检查 支气管肺泡灌洗液（BALF） BALF是通过支气管镜向支气管肺泡内注入生理盐水并进行抽吸，收集肺泡表面液体，通过检查细胞成分、可溶性物质和感染性病原体，诊断肺部相关疾病、评价疗效和预后。标本包括：BALF和保护性毛刷（PSB） 适应症 肺部感染，特别是免疫受损患者肺部机会性感染的病原体诊断。 肺部不明原因阴影、疑似肺部感染或需与其他疾病鉴别。 BALF采集 BALF收集：由专科医生采集。用于病原学分析的标本需用无菌容器收集；细胞学分析需选择塑料容器或硅化的玻璃容器以减少细胞的黏附。 送检量至少5毫升（10-20毫升最佳）。 检测目的 转运条件 保存条件 检测方法 细菌 无菌容器，室温，≤2h ? 4℃，≤24h ? 革兰染色 定量培养 奴卡菌 革兰染色 弱抗酸染色 培养 军团菌 培养（BCYE营养培养基、GVPC及MWY筛选培养基） 核酸检测 抗原检测（DFA） 真菌 无菌容器，室温，≤2 h ? 4℃，≤24 h ? KOH压片、荧光白染色 真菌培养 曲霉 KOH压片或荧光白染色 真菌培养 半乳甘露聚糖抗原试验（GM） 肺孢子菌 六胺银染色 核酸检测 抗原检测 隐球菌 墨汁染色 真菌培养 隐球菌荚膜多糖抗原 分枝杆菌 无菌容器，室温，≤2 h 4℃，≤24 h 涂片抗酸染色(萋-尼染色、荧光染色) 分枝杆菌培养 核酸检测（Xpert MTB/RIF） 病毒 病毒转运培养基，室温，≤2 h 4℃，≤5 d；-70℃，?5 d 核酸检测 病毒抗原检测（DFA、胶体金法） 分离培养 寄生虫 无菌容器，室温，≤2 h 4℃，≤24 h 直接镜检 核酸检测 抗原检测（ELISA、ICT） BALF标本运送与保存 室温条件下2h内送至实验室。 若延迟送检，可将标本放置于2～8℃保存，但不可超过24h。 BALF临床应用 BALF诊断的疾病 弥漫性间质性肺病 2 3 1 4 职业性肺部疾病 延迟符 5 肺部感染 肺部肿瘤 儿科肺部疾病 延迟符 形态学检查（细胞分类） 淋巴、中性粒细胞 高倍 纤毛上皮细胞 油镜 细胞学分类的临床意义 中性粒细胞比例增高为主时，见于各种细菌或真菌等感染； 淋巴细胞比例增高为主时，见于病毒性肺炎、结节病或过敏性肺炎。 嗜酸粒细胞比例增高为主时，见于嗜酸粒细胞浸润症、支气管哮喘等。 延迟符 病原学检查 BALF标本病原体实验室检测 显微镜检查 革兰染色及BALF质量评价：建议使用细胞离心机制片，取适量BALF标本600～1 000 r/min离心10～20 min,进行革兰染色。低倍镜下若鳞状上皮细胞占全部细胞比例1%，提示标本被上呼吸道分泌物污染；柱状上皮细胞5%时,提示BALF并非来自于远端气腔。观察革兰染色结果及白细胞情况，如果见到噬菌现象，须报告吞噬细菌的中性粒细胞占或全部中性粒细胞的比例，通常数值为5%时可作为肺炎诊断的阈值。 BALF标本病原体实验室检测 抗酸染色： 用于检测分枝杆菌，弱抗酸染色可用于检测奴卡菌。 氢氧化钾(KOH)压片： 用于真菌，特别是丝状真菌的形态学观察。 墨汁染色： 用于隐球菌的检测。 六胺银染色： 常用于肺孢子菌的检测。 免疫荧光显微镜： 可用于军团菌、肺孢子菌及病毒的检测。 BALF标本病原体实验室检测 一般细菌培养（定量培养）： （1）涡旋震荡BALF标本30～60s。 （2）定量接种：用经校准的加样器（或定量接种环）取10μl 的BALF标本，分别点种于血平板和巧克力平板上且密集划线，有条件时最好采用灭菌L型玻棒涂布平板。还可取100μlBALF接种于麦康凯或中国蓝培养基。 （3）孵育：将接种的平板放在二氧化碳培养箱（5%～10%CO2）中，35℃培养48 h。 BALF标本病原体实验室检测 一般细菌培养（定量培养）： （4）结果判定：分别对不同形态的菌落进行计数，乘上稀释倍数即为此细菌的菌落数。菌落计数BALF≥104 CFU/ml或无菌防污染BALF≥103CFU/ml时认为是可能的病原菌，但不能机械使用该阈值，还要结合患者的实际情况及有无使用抗菌药物等因素综合判断。 BALF标本病原体实验室检测 真菌培养： BALF标本1500～1800×g，离心15～20min，沉淀物混匀后接种于沙保平板上，30℃和35℃孵育7d，怀疑双相真菌时应使用带螺帽的培养基，孵育6周。 特殊病原菌培养： BALF离心后的沉淀物还可用于分枝杆菌、军团菌及病毒等的培养。 * * * * * *