动物细胞培养华安第一中学.PPT

供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵母细胞 注入 细胞融合 重组细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状 3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 ① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 4、应用前景： ⑤ 可以用于组织器官的移植 5、存在问题： ① 成功率低 ② 克隆动物存在健康问题 ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议 体细胞核移植方法生产的克隆牛是对卢辛达进行了100%的复制吗？为什么？ 不是，克隆动物绝大部分DNA来自供体细胞核，但核外还有少部分DNA（如线粒体DNA）来自受体卵母细胞。此外，还会受到不同环境的影响 思考： * 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植 * 胰蛋白酶水解蛋白质 * 分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应，代谢废物容易排除；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排除都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长较困难。 * 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 * 胃蛋白酶最适PH约为2.在PH为7的环境下已经失去活性 * * 1997年7月5日，世界上首只体细胞克隆哺乳动物诞生多利实施安乐死。这是2003年，多利享年6岁，是正常绵羊寿命的一半 。2007年，科学家成功地将皮肤细胞转化为干细胞――不需要卵细胞、不需要核转移、不需要胚胎、不制造成体。虽然仍不断有克隆成果问世，但干细胞技术似乎更有前途，甚至连威尔穆特也改弦易辙，他宣布放弃核转移克隆技术，转向成体干细胞领域。 * 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 华安一中生物组赵丽娜 2017年4月10日 生活联系： 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 最基础的是 ——动物细胞培养技术 动物细胞工程常用的技术： 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体 等 一、动物细胞培养 1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 原理： 细胞增殖 如何进行动物细胞培养? 放入二氧化碳培养箱中培养 动物细胞培养过程示意图 （结合问题思考流程） 1、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞呢？ 2、如何将动物组织分散成单个的细胞？ 3、胰蛋白酶的作用是什么？由此可说明细胞间的物 质主要是什么成分？ 4、培养瓶或培养皿的内表面为何要光滑、无毒？ 5、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再分裂、增殖？ 细胞贴壁 接触抑制(contact inhibition) 1、动物细胞培养的过程： 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 加培养液 细胞悬液 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 无限传代 遗传物质未改变 遗传物质已改变 原代培养：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 传代培养：原代培养的细胞出现接触抑制后，贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞增殖。这样即为传代培养。 分类：10代内的细胞；10-50代；50代以后。 有关概念： 1、选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的，这是为什么？ 因为幼龄组织或器官上的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 老龄动物的细胞则相反。 寻根问底，加深巩固 2、胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？ 能够用胃蛋白酶代替吗？ 控制好消化时间，太长会消化细胞膜上的蛋白质 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近. 3、动物细胞培养能否最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 原代培养 细胞增殖 部分细胞无限传代 去掉组织间蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 传代培养 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中