保健食品中五味子醇甲五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定.doc

保健食品中五味子醇甲五味子甲素和乙素的高效液相色谱测定 Determination of schisandrin、deoxyschisandrin、Schisandrin B in health food by high-performance liquid chromatography 范围 本方法规定了以五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的HPLC测定方法。 本方法适用于以五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素含量的HPLC测定方法。 本方法的检测限分别为五味子醇甲0.02μg，五味子甲素 0.03μg，五味子甲素0.02μg。 本方法的最佳线性范围为0.2－10μg。 原理 将试样中的木脂素提取后，使用等度洗脱反相高效液相色谱进行分离，紫外检测器（UV）检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量，适用于以北五味子为主要原料生产的保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和乙素定量分析。 试剂 3.1 水为双重蒸馏水 3.2 甲醇：色谱纯。 3.3 高效液相色谱流动相：等度淋洗。 3.4五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准品：含量均大于98％（HPLC）。 3.5五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准溶液的配制： 配制五味子醇甲、五味子甲素和乙素标准储备液，浓度分别为3 mg/mL, 再以此储备液配制成混合标准系列溶液，浓度范围为0.02mg/mL～1mg/mL；所有标准溶液均用甲醇配制。 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪：双高压输液泵，附紫外检测器。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 分析步骤 5.1试样处理：精密称取粉碎后的五味子0.25g,置20mL具塞锥形瓶中,加入甲醇约18ml, 超声提取20分钟,取出，静置待冷, 加甲醇至刻度。试样溶液过0.45 μm油膜，滤液进行色谱分析。 5.2 测定： 5.2.1 液相色谱参考条件 5.2.1.1 色谱柱：反相C18柱，5μm, 100?, 4.6 x 250 mm 5.2.1.2 紫外检测器：检测波长 254 nm 5.2.1.3 等度淋洗条件：甲醇/水=77/23（v/v） 流速：1 mL/min 5.2.1.4 柱温：35°C 5.2.2 色谱分析 5.3.2.1 标准曲线的制备 将标准混合系列溶液均取10μL进HPLC分析，用峰面积对浓度计算五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准回归曲线。 5.3.2.2 试样测定 取10μL试样净化液进行高效液相色谱分析，以绝对保留时间定性，用峰面积通过五味子醇甲、五味子甲素和乙素的标准曲线定量计算试样中的含量。 分析结果的表述 6.1 计算 C × 2 0 试样中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量（mg/g）＝ m 式中：C  试样溶液中五味子醇甲、五味子甲素和乙素的含量，mg/mL； m 试样质量，g； 6.2 结果表示：分析结果保留三位有效数字。 色谱图 *：1为五味子醇甲，2为五味子甲素， 3为五味子乙素。