第四章细胞破碎.pptVIP

第四章细 胞 破 碎;概述;概述;概 述;1 细胞壁结构;细菌细胞壁结构;细菌细胞壁结构; 酵母细胞壁的结构示意图;真菌的细胞壁;红面包霉菌细胞壁具有同心圆层状结构主要存在三种聚合物 最外层(a)是α-和β-葡聚糖的混合物， 第2层(b)是糖蛋白的网状结构 第3层(c)主要是蛋白质， 最内层(d)主要是几丁质。;微生物;植物细胞壁的结构;植物次生细胞壁;细胞破碎方法;方法; ※ 2 CHEMICAL METHODS 化学方法;表4.1-1介绍了主要的几种化学方法，有渗透冲击法，表面活性剂增溶法、脂溶法。首先简单的介绍一下酶消化法和碱处理法。; 酶消化法和碱处理法都是细胞破碎的有效方法，但是也都有各自的缺点。;1 酶解（酶溶法 Enymatic lysis);外加酶法;外加酶法;酶解法的特点 ; 碱处理法和酶消化法相反，反应激烈，不具选择性，而且较便宜。碱加入细胞悬浮液中后和细胞壁进行了多种反应，包括使磷脂皂化。 ; 碱能溶解细胞壁上脂类物质或使某些组分从细胞内渗漏出来。 成本低，反应激烈，不具选择性。;1）渗透压冲击法 ;渗透流的动力来自渗透压，渗透压可能很大。可以通过化学平衡来估算，水的化学电势是常数，即： μH20 (outside) = μH20 (inside) (4.3-1);细胞外纯水的化学电势包括标准化学电势和压力修正项；与之平衡的胞内的化学电势包括三项，即标准化学电势、压力修正相和浓度修正项。对于理想的不可压缩溶液，这些修正相和式（4.2-1）可改写为： μ0 H20+VH2oPout = μ0 H20+VH2oPin+RT ln(1-x1) (4.3-2) ;μ0H20——标准化学电势 VH2o——水的偏摩尔体积 x1——细胞内所有溶质的总摩尔分数 若包内物为稀溶液，其偏摩尔体积等于纯水的摩尔体积。且x1很小时就有：; Pout-Pin=(RT/--VH2o)×ln(1-x1) =(RT/--VH2o) ×(-x1-…) =-RTc1+ … (4.3-3) 该式称为范特苛夫定律。;由该方程知细胞内压力必须小于细胞外压力，否者，水会流入细胞内，溶破细胞。我们可以采用等式4.2-3 估算出渗透压的大小。许多细胞内溶质浓度大约为0.1M NaCl 或0.2M溶质 。 由此可见渗透压必须很大，才导致了细胞的破碎。 ;通用性差； 时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超???50%. ;2） 、 增溶法 ;细胞破碎常用的表面活性剂： 十二烷基硫酸钠（SDS，阴离子型）；。 非离子型如Triton X-100和吐温（Tween）等 对疏水性物质具有很强的亲和力，能结合并溶解磷脂，破坏内膜的磷脂双分子层，使某些胞内物质释放出来。;方法有效在于表面活性剂的化学性质，化学性质由图4.3-1所示的化学结构表示。结构中有一个亲水基团，通常是离子；一个疏水基团，通常是烃基。 表面活性剂通常是两性的，既能和水作用也能和脂作用。;;无论表面活性剂是阴离子、阳离子还是非离子型，都是两性的。SDS（十二烷基磺酸钠）是典型的阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂还包括肥皂（脂肪酸盐）。;由于肥皂的增溶作用依赖于羧基，因此只有在PH 值较高，羧基解离的情况下，肥皂才是有效的表面活性剂。在硬水中，由于Ca2+与羧酸基团形成不可溶的沉淀，而使肥皂失效。;可通过将肥皂的羧基用硫酸盐代替来改变传统肥皂的缺点。硫酸盐代替的肥皂是目前洗衣店常用及超市中常见的表面活性剂。硫酸盐可连在苯环上，结构如图4.2-1所示。这种硫酸盐表面活性剂比碱对细胞破碎的作用更好，磺酸盐不易被微生物降解，所以洗衣店中并不常用。;阳离子表面活性剂主要是烷基胺盐。图4.3-1中的十二烷基溴胺是典型的例子。它有一个长烷烃链（十六烷基）和三个甲基，都连接在一个带正电的氮原子上，负离子通常是卤素，市场上常做洗发剂出售。细胞破碎时条件较温和。 ;非离子表面活性剂是溶于水的聚合物。经济价值不明确，市场上用于做洗碗剂。同样，这种清洁剂既有亲水基团又有疏水基团。亲水基团不是硫酸盐，不是烷基胺盐而是乙醇。;这类表面活性剂起作用在于能溶解细胞壁中的脂，进行细胞破碎。图4.3-2表示了该表面活性增溶的原理。在高度稀释洗涤剂中，脂会溶解在溶液中；超过这个浓度溶解的物质的量与浓度成正比。还有，表面活性剂的表面张力是常数，表面活性的选择电极可以突然改变。;能分解细胞壁中的磷脂，使细胞结构破坏，胞内物质被释放出来。 有机溶剂可采用丁酯、丁醇、丙酮、氯仿和甲苯等 ;二　机械法;采用高压匀浆器（由高压泵和匀浆阀组成）。;;